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組換え蛋白質を抗原とした樹木のリグニン生合成酵素の免疫組織化学的解析

使用重组蛋白作为抗原对树木木质素生物合成酶进行免疫组织化学分析

基本信息

批准号：
08876016
负责人：
川合伸也
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1997
项目状态：
已结题

项目摘要

交雑ヤマナラシのフェニルアラニンアンモニア・リアーゼ、桂皮酸4-ハイドロキシラーゼ、コーヒー酸σメチルトランスフェラーゼ、シンナミルアルコール・デヒドロゲナーゼ、酸性ペルオキシダーゼの各遺伝子の全部、もしくは一部を大腸菌のヒスチジン・タグ融合蛋白質発現ベクターに連結して、大腸菌中でそれらの酵素蛋白質を生産させた。生産された蛋白質をヒスチジン・タグに対して特異的に親和性を持つニッケル・アガロースカラムを用いて精製した。これらの融合蛋白質を用い兎に免疫して一次抗体を作製した。作製した抗体の評価をウエスタン法で行い、単一の蛋白質を認識することを確かめ、免疫組織化学的手法に用いることが出来ることが判った。これらの抗体を用いて交雑ヤマナラシ中における時期及び組織特異的発現解析を行った。その結果、これらの蛋白質は主に維管束で発現しているが、傷害により組織非特異的に発現することが判った。また、維管束の中でも、時期により発現する細胞が決まっていることが判った。更に、免疫組織化学的な解析に加えて、in situ hybrdizationによる遺伝子の発現解析を樹木に応用するための系を構築した。その結果、免疫組織化学的な解析では区別しにくい多重遺伝子族の発現を、プローブの選び方によってはin situ hybridizationを用いることで個々に選別することに成功した。

雑ヤマナラシのフェニルアラニンアンモニア・リアーゼ, cinnamic acid 4-ハイドロキシラーゼ、コーヒー acidσメチルトランスフェラーゼ、シンナミルアルコール・デヒドロゲナーゼ、Acidic ペルオキシダーゼのeach leaving 伝子の全、もしくは一一をcoliformのヒスチジン・The タグ fusion protein is produced by the ベクターに connection and the coliform enzyme protein is produced by the タグ fusion protein. Produces the specific protein of されたprotein をヒスチジン・タグに対してWaxing つニッケル・アガロースカラムを Used いて refined した. The これらのfusion protein was produced using いにimmune primary antibody. Comments on how to make antibodies and know how to make antibodies The method of immunohistochemistry and immunohistochemistry is correct and accurate. The anti-antibodies are analyzed by using the いて and ヤマナラシ中における periods and the tissue-specific symptoms.そのRESULTS, これらのprotein は主にvascular bundle で発appears しているが, damage によりtissue non-specific に発appears することがadjusted った.また, vascular bundle の中でも, period により発 appear するcell がdetermine まっていることがadjusted った. More information, analysis of immunohistochemistry, analysis of hybrdization in situ hybrdization, analysis of trees, and analysis of hybrdization in situ.そのResults, immunohistochemistry なanalysisではdifferentiationしにくいmultiple inheritance㼝subfamilyの発appearを、プローブの选び方によってはin situ Hybridization is successful in selecting and selecting each one.