自己抗体の抗原物質検索システムの開発と応用

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自己抗体検索の従来法である発現cDNAライブラリーを用いた方法にて自己抗体に対する抗原蛋白質を検索した。この目的のために縦隔腫瘍に伴う傍腫瘍性症候群患者自己抗体を使用することとし、ヒト脳λgt11 cDNAライブラリースクリーニングで同抗体に対する2つの陽性クローンを得た。この2つのクローンのDNA配列決定の結果、両者ともphosphacanとして知られている神経系のプロテオグリカンの一部をコードしていることが明らかとなった。このような従来法による検討結果を基に、次により簡便なスクリーニング法の開発に着手した。上記phosphacan cDNAが含まれていることが確認されたライブラリーの全インサートDNAを、Sfi I site又はNot I siteを含むようにデザインしたPCR primerでPCR増幅し、pCAN-TAB5に再組み込みすることによりphage displayライブラリーの作製を試みた。しかしながら、十分なタイタ-をもつ良好なライブラリーの作製には至らず、上記患者抗体を結合させたバイオセンサーチップ上にトラップされたクローンにはphosphacan cDNAは検出されなかった。現在、他のphage display vectorであるSurfZAP vectorへの組み込みを試みている。又、ヒト脳mRNAからphage display vectorに組み込み可能なcDNAライブラリーの構築も平行して行っている。