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血小板と巨核球に発現してるチャネル直結型ADP受容体と分泌現象の新しい解析法

血小板和巨核细胞表达的通道导向ADP受体及其分泌现象的新分析方法

基本信息

批准号：
09877007
负责人：
河和善
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

平成10年度:1. ヒトの巨核球系細胞での解析:血液系細胞はヒトと実験動物とで,刺激に対する反応や基本機能が微妙に異なることが有りうる。前年度に明らかになったプリン2X型受容体の存在やセロトニンとADPの放出をヒト由来巨核球系cell lineを用いて調べた。調べたcell lineのうち白血病患者から樹立された、cell line(Meg-01)において血小板特異受容体(P2x-R)の存在が確認された。RPM1640培地(10%FCS添加)に生理的な分化因子であるトロンボポエチン(thrombopoietin)を加えると約3倍のADPへの反応が誘発された。実験的な分化促進因子であるphorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)を加えた場合は無添加の場合に比べて約2倍のADPへの反応が誘発された。巨核球の分化・成熟に伴いこれらの受容体が発現し、血小板に組み込まれることがマウスおよびヒトの巨核球系細胞で明確に示された。2. カーボン・ファイバー電極法の改良と放出物質制御機構の解析:巨核球や血小板の細胞質にある濃染顆粒(セロトニンやADPを含む顆粒)は、生理的刺激により放出される。骨髄から分離した巨核球をwhole-cell法にて記録すると、スパイク状の膜電流が頻繁に発生する事が観察された。ADPやトロンビン(生理的刺激物質)ないしフォルボールエステル(実験的刺激物質)を巨核球に与えると、膜電流応答の出現頻度は増し、これら放出された物質は改良したカーボン・ファイバー電極(先端経5um)によりスパイク状の酸化反応電流として存在が確認された。

Heisei 10:1. Analysis of megakaryocyte lineage: blood lineage cells are sensitive to stimuli and basic functions. In the past year, the existence of 2X-type receptors and the release of ADP were regulated by the use of megakaryosomes. The presence of platelet-specific receptor (P2x-R) in cell line(Meg-01) was confirmed in leukemia patients. RPM1640 culture (10% FCS added) increased the physiological differentiation factor by about 3 times as much as ADP. In the presence or absence of PMA, phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA) is about twice as potent as ADP. The differentiation and maturation of megakaryocytes are accompanied by the development of receptors, and the formation of platelets and megakaryocytes are clearly indicated. 2. The improvement of the electrode method and the analysis of the control mechanism of released substances: megakaryocyte, platelet cytoplasm, concentrated staining particles (including ADP), physiological stimulation, release. The membrane currents in the form of bone fragments were recorded by the whole-cell method and observed frequently. The frequency of membrane current response increased due to the release of ADP, a physiological stimulus, and the presence of an acidizing current at the electrode (top 5um).