内向き整流K^+チャネル遺伝子導入による頻拍性不整脈治療(成熟動物心筋細胞を用いた基礎研究)

通过内向整流K^+通道基因转移治疗快速心律失常（使用成年动物心肌细胞的基础研究）

• 批准号: 09877011
• 负责人: 清末 達人
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: 大分医科大学
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877011/
• 关键词: 内向き整流K^+チャネル; ラット培養心筋細胞; IRK1(Kir 2.1); 遺伝子導入; パッチクランプ法; 頻拍性不整脈; IRK1 (Kir 2.1); IRK1(Kir2.1)

本研究では、頻拍性不整脈における新たな治療法を開発することをめざし、心筋細胞に外来のK^+チャネル遺伝子を導入する試みを行ってきた。これまでにアフリカツメガエル卵母細胞や、哺乳動物培養細胞株(CHO細胞、COS細胞)へIRK1チャネル遺伝子を導入し、単一チャネル電流および全細胞電流を記録して、単一チャネルコンダクタンスや、平均開時間、閉時間、Ba^<2+>感受性などを調べ、IRK1チャネルの発現を確認した。本年度は、成熟心筋細胞への遺伝子導入への第一歩として、ラットの異所心移植モデル(Ono-Lindseyモデル)を作成し、電気穿孔法による遺伝子ベクター導入の試みを行った。このモデルは、ドナー心の大動脈と肺動脈をレシピエントの下大動脈と下大静脈に、それぞれ吻合させるものである。移植された心臓はレシピエントの血液循環を担う必要がないので、電気穿孔法を用いた遺伝子導入手技に伴う侵襲に十分耐えることができる。K^+チャネル遺伝子の導入に先だち、遺伝子発現のレポーター分子GFP(Green Fluorescent Protein)をコードするベクターの導入実験を行った。その結果、広範な心筋細胞が蛍光を発するようになり、電気穿孔法による遺伝子導入が可能であるという示唆が得られた。その後、実際にIRK1の遺伝子導入実験を続けているが、現段階では明らかなチャネル発現は確認されていない。今後とも引き続き、最適な手技の開発をめざして検討を進める予定である。

This study で は, frequency is not the whole pulse に お け る new た な therapy を open 発 す る こ と を め ざ し, heart muscle cells に foreign の K ^ + チ ャ ネ ル heritage 伝 son を import す る try み を line っ て き た. こ れ ま で に ア フ リ カ ツ メ ガ エ ル oocytes や, mammals culture cell line (CHO cells, COS) へ IRK1 チ ャ ネ ル heritage 伝 を import し, 単 a チ ャ ネ ル current お よ び whole-cell current を record し て, 単 チ ャ ネ ル コ ン ダ ク タ ン ス や, average opening time and closing time, Ba ^ 2 + > < susceptibility な ど を adjustable Youdaoplaceholder0, IRK1チャネ チャネ を を confirmation た. This year は, mature heart muscle cells へ の heritage 伝 son import へ の first step と し て, ラ ッ ト の heart transplantation by different モ デ ル (Ono - Lindsey モ デ ル) を し, consummate 気 perforation method に よ る heritage 伝 son ベ ク タ ー import の try み を line っ た. こ の モ デ ル は, ド ナ の ー heart arteries と pulmonary を レ シ ピ エ ン ト の artery under vena cava under と に, そ れ ぞ れ anastomosis さ せ る も の で あ る. Heart transplant さ れ た viscera は レ シ ピ エ ン ト の blood circulation を bear う necessary が な い の で, 気 perforation method を い た heritage 伝 son import manipulation に with う invade に very resistant to え る こ と が で き る. K ^ + チ ャ ネ ル posthumous son 伝 の import に だ first ち, but 伝 発 is の レ ポ ー タ ー molecular GFP (Green Fluorescent Protein) を コ ー ド す る ベ ク タ ー の import be 験 を line っ た. そ の results, hiroo van な heart muscle cells が 蛍 light を 発 す る よ う に な り method, electric 気 perforation に よ る heritage 伝 son import が may で あ る と い う in stopping が must ら れ た. そ の after the event, be に IRK1 の posthumous son 伝 import be 験 を 続 け て い る が, now Duan Jie で は Ming ら か な チ ャ ネ ル 発 は now confirmed さ れ て い な い. In the future, と will introduce と 続 続 である, and the most suitable な techniques will be developed をめざ, <s:1>, て検 and を will be determined in める.

项目成果

安部 隆子: "Inhibition of Na^+-K^+ pump alleyiates the shortening of action potential duration casued by metabolic inhibition via blockade of K_<ATP> channels in coronary perfused ventricular mucscle of guinea pigs."Journal of Molecular and Cellular Cardiolog

Takako Abe：“抑制 Na^+-K^+ 泵可以通过阻断豚鼠冠状动脉灌注心室肌中的 K_<ATP> 通道来缓解代谢抑制引起的动作电位持续时间缩短。”《分子与细胞心脏病学杂志》

安部 隆子: "Inhibition of Na^+-K^+ pump alleviates the shortening of action potential duration caused by metaoolic inhibition via blockade of K_<ATP> channels in coronary perfused ventricular muscles of guinea" Journal of Molecular and Cellular Cardiology. (印

Takako Abe：“通过阻断几内亚冠状动脉灌注心室肌中的 K_<ATP> 通道，Na^+-K^+ 泵的抑制可减轻代谢抑制引起的动作电位持续时间的缩短”《分子与细胞心脏病学杂志》。

立川 洋一: "Mechanical stretch increases intracellular,calcium concentration in cultured ventricular cells from neonatal rats." Heart and Vessels. 12・3. 128-135 (1997)

Yoichi Tachikawa：“机械拉伸可增加新生大鼠心室细胞内的钙浓度。”12・3 (1997)。

清末 達人: "慢性糖尿病ラット心室筋細胞の膜電流異常" 心電図 Japanese Journal of Electrocardiology. 17・4. 329-334 (1997)

Tatsuto Kiyosue：“慢性糖尿病大鼠心室肌细胞的异常膜电流”心电图日本心电学杂志17・4（1997）。

清末 達人: "心筋のK^+チャネル" ハートビュー Heart View. 1・2. 249-255 (1997)

Tatsuto Kiyosue：“心肌中的 K^+ 通道”Heart View 1・2。