ヒトPTH受容体遺伝子の導入によるヒト破骨細胞形成系の確立

导入人PTH受体基因建立人破骨细胞形成系统

• 批准号: 09877355
• 负责人: 須田 立雄
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877355/
• 关键词: 破骨細胞; 骨芽細胞; SaOS-2; 破骨細胞分子因子(ODF); PTHレセプター; M-CSF; ヒト抹消血単核細胞; 共存培養; ヒト抹消血; 副甲状腺ホルモン; PTH; ヒト破骨細胞

ヒト骨芽細胞SaOS-2細胞にPTH受容体遺伝子を導入したSaOS-4/3細胞を樹立し、更に本細胞を用いヒト破骨細胞形成系を確立した。(1) 株化ヒト骨芽細胞SaOS-2にPTH受容体遺伝子を導入した細胞SaOS-4/3細胞を樹立した。親株のSaOS-2細胞をPTHで処理してもcAMPの産生亢進は殆ど起こらなかったが、SaOS-4/3細胞のcAMP産生能はPTHに反応して著しく上昇した。(2) SaOS-4/3細胞とマウスの脾細胞の共存培養系に各種の骨吸収因子(PTH、1α,25(OH)2D3、PGE2、IL-6+可溶性IL-6受容体)を添加し、破骨細胞の形成を評価した。破骨細胞の形成はPTH添加により促進されたが、他の骨吸収因子は破骨細胞の形成を全く促進しなかった。一方、親株SaOS-2細胞とマウス脾細胞の共存培養系においては、PTHを含む各種の骨吸収因子は破骨細胞の形成を促進しなかった。(3) ヒト末梢血単核細胞をSaOS-4/3細胞と共存培養すると、PTHに反応してヒト破骨細胞が形成された。象牙質切片上でPTHの存在下でこの共存培養を行うと切片上に多数の吸収窩が形成された。(4) マウスの共存培養系と同様に、ヒト末梢血単核細胞とSaOS-4/3細胞の共存培養系における破骨細胞形成はGM-CSFにより強力に抑制された。また、M-CSF抗体によりマウスとヒトの破骨細胞形成は抑制された。(5) SaOS-4/3細胞はPTH処理により破骨細胞分化因子(osteoclast differentiation factor,ODF)のmRNAの発現が誘導された。一方、親株SaOS-2細胞ではODF mRNAの発現は誘導されなかった。

ヒ ト bone bud cells SaOS - 2 に PTH by let body heritage 伝 son を import し た SaOS - four thirds cells を し, more に this cell を い ヒ ト osteoclast formation is を establish し た. (1) Strain ヒト bone bud cells SaOS-2にPTH acceptor remains 伝 を introduction of <s:1> た cells SaOS-4/3 を establishment of a た. Parent strain の SaOS - 2 cells を PTH で 処 Richard し て も cAMP production の hyperthyroidism は perilous ど こ ら な か っ た が, SaOS - four thirds cell の cAMP can produce は PTH に anti 応 し て the し く rise し た. (2) SaOS-4/3 cells と ウス ウス coexisting culture line of <s:1> spleen cells <e:1> に various <s:1> bone resorption factors (PTH, 1α,25(OH)2D3, PGE2, IL-6+ soluble IL-6 receptor)を addition of <s:1> osteoclast <e:1> formation を evaluation 価 た The formation of osteoclasts <s:1> is promoted by the addition of によ されたが and other bone resorption factors. The formation of osteoclasts <s:1> is promoted by the addition of を. The formation of osteoclasts <s:1> is promoted by the addition of によ. One party, the parent strain SaOS - 2 cells と マ ウ ス spleen cells の coexistence cultivation system に お い て は, PTH を containing various の む bone absorption 収 factor の は osteoclast formation を promote し な か っ た. (3) ヒ 単 nuclear ト peripheral blood cells を SaOS - four thirds cell と coexistence culture す る と, PTH に anti 応 し て ヒ が ト osteoclast formation さ れ た. In the presence of でPTH <e:1> on the dentin section, で and <s:1> coexist and are cultured. In を rows of うと sections, に and most <s:1> aspiration pits が form された. (4) マ ウ ス の coexist with training department と others に, ヒ 単 nuclear ト peripheral blood cells と SaOS - four thirds cell の coexistence culture に お け る osteoclast formation は gm-csf に よ り powerful に inhibit さ れ た. Youdaoplaceholder0, M-CSF antibody によ によ ウスとヒト ウスとヒト ウスとヒト <s:1> <s:1> osteoclast formation inhibition された. (5) the <s:1> PTH treatment of SaOS-4/3 cells によ the occurrence of <s:1> osteoclast differentiation factor (ODF) <s:1> mRNA <e:1> が induces された. One party, the parent strain SaOS-2 cells で <s:1> ODF mRNA <s:1> induced されな った った った った った った

项目成果

Matsuzaki,K.,et al.: "Human osteoclast-like cells are formed from peripheral blood mononuclear cells in a coculture with SaOS-2 cells transfected with the parathyroid hormone(PTH)PTH-related protein receptor gene." Endocrinology. 140. 925-932 (1999)

Matsuzaki, K. 等人：“人破骨细胞样细胞是由外周血单核细胞与转染甲状旁腺激素 (PTH)PTH 相关蛋白受体基因的 SaOS-2 细胞共培养形成的。”

kawasaki,K.,et al.: "Osteoclasts are present in gp 130-deficient mice." Endocrinology. 138. 4959-4965 (1997)

kawasaki,K.,et al.：“破骨细胞存在于 gp 130 缺陷小鼠中。”

Nakamura,I.,et al.: "Lack of vacuolar proton ATPase association with the cytoskeleton in osteoclasts of osteosclerotic (oc/oc) mice." FEBS Lett.401. 207-212 (1997)

Nakamura,I.,et al.：“骨硬化 (oc/oc) 小鼠破骨细胞中缺乏与细胞骨架相关的液泡质子 ATP 酶。”

Nakamura,I.,et al.: "Src-dependent tyrosine phosphorylation of p130^<Cas> is required for actin ring formation in osteoclasts." J.Biol.Chem.273. 11144-11149 (1998)

Nakamura,I.,et al.：“破骨细胞中肌动蛋白环的形成需要 p130^<Cas> 的 Src 依赖性酪氨酸磷酸化。”

Isogai,Y.,et al.: "Parathyroid hormone regulates osteoblast differentiation positively or negatively depending on the diffrentiation stages." J.Bone Miner.Res.11. 1384-1393 (1996)

Isogai,Y.,et al.：“甲状旁腺激素根据分化阶段积极或消极地调节成骨细胞分化。”