天然抗酸化物質のスクリーニングのためのアッセイ系の構築

天然抗氧化剂筛选检测体系的构建

• 批准号: 09878006
• 负责人: 安原 義
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: College of Tokyo University of Agriculture
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878006/
• 关键词: 抗酸化; β-カロテン・リノール酸系; HTS; コンビナトリアルケミストリー; 高効率スクリーニング; β-カロチン・リノール酸系; 乳タンパク質加水分解物; 活性ペプチド; ウシカゼイン; アミノ酸配列

スクリーニングのためのアッセイ系として求められるものは簡便・迅速・高感度のアッセイ系である。このため初年度はマイクロプレートリーダーを用いたβ-カロテン・リノール酸によるHigh-Throughput Screening(HTS)を構築し、乳カゼインの酵素消化物中の抗酸化ペプチドの探索を行いI-N-N,I-K-H-Q,A-R-H-P-H-P,F-Q-S-Qのペプチドを単離した。 本年度は大豆の酵素消化物中の抗酸化ペプチドとしてH-M.Chenらがチオシアン鉄法で見いだした抗酸化ペプチドL-L-P-H-Hをリードとした各種ペプチドライブラリーを用いて活性を比較したところ活性の有無については相関があったが、活性の強さについては一致しなかった。チオシアン鉄法ではアミノ酸配列と活性の強さには相関がなかった。しかし、本HTSではP-H-H,H-H-Pのアミノ酸配列を含むペプチドに強い抗酸化活性を見いだした。 そこで、抗酸化活性の最小単位はトリペプチドとしてCys残基を除く19種のアミノ酸残基の組み合わせによる6859種のトリペプチドをコンビナトリアルケミストリーの手法を用い固相合成を行いHTSを行った。その結果N-末端がArg,Leu,Proそして第二残基がHis,Trpのいずれかの場合顕著な抗酸化活性が認められた。二次ライブラリーとしてフリーの108種のトリペプチドを合成し、HTSを行いLHW,LWW,PHY,PWW,RHW,RHYおよびRWWが強い抗酸化能を示した。本測定法は抗酸化物質の探索に使用する試料が微量であり、反応機構はすでに確立されており、安定な条件が設定しやすいこと、一度に96の試料が処理できること、測定時間は試薬調整を含め1時間と迅速である点でスクリーニングに有用な方法である。

Easy, fast, and highly sensitive In the early years of this year, the construction of High-Throughput Screening(HTS) in enzyme digests of dairy products was explored in the study of I-N-N,I-K-H-Q,A-R-H-P-H-P,F-Q-S-Q. This year, the anti-acidification activity of soybean enzyme digest was compared with that of H-M.Chen's anti-acidification method, L-L-P-H, L-L-H, L-L-P-H, L-L-H, L-L-P-H, L-L-P-H, L The iron law of the United States of America is not applicable to acid coordination and activity. The HTS has strong anti-acidification activity due to its P-H-H,H-H-P acid sequence. The minimum unit of anti-acidification activity was selected from 19 kinds of Cys residues, and the composition of 6859 kinds of Cys residues was selected from 19 kinds of Cys residues. As a result, the N-terminal residue is Arg,Leu,Pro, and the second residue is His, and Trp is also recognized as having anti-acidification activity. 108 kinds of secondary acid reactions were synthesized and HTS was used in LHW,LWW,PHY,PWW,RHW,RHY and RWW. This method is used to explore the use of anti-acidification substances, such as trace amount of sample, reaction mechanism, stability condition, determination time, test adjustment, including 1 time, rapid adjustment, and useful method.

项目成果

安 原義: "合成トリペプチドライブラリーの構築と抗酸化活性ペプチドの高効率スクリーニング" 農学集報. 43・4(印刷中). (1999)

Yasu, Hara：“合成三肽文库的构建和抗氧化活性肽的高效筛选”农业杂志 43, 4（出版中）。