マダイ鰓のホスホリパーゼA_2と生体防御

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1. マダイ鰓PLA_2の精製と特異抗体の作製マダイの鰓組織にI型ホスホリパーゼA_2(PLA_2)が極めて多量に存在することから、本酵素は鰓組織の細胞表層に分泌され、細菌感染の防御因子として機能するものと推定した。このことを証明するために、マダイの鰓組織よりPLA_2を精製し、精製酵素を抗原としてマウスに接種免疫した後、精製PLA_2に反応する7種のモノクローナル抗体を作製することに成功した。これまでの研究により、マダイには鰓組織の他、肝膵臓にも2種類のI型PLA_2イソフォームが存在することが明らかにしている。そのため、現在マダイ鰓I型PLA_2のみに反応し、肝膵臓の2種のI型PLA_2イソフォームには反応しないモノクローナル抗体を選定している。今後は、マダイ鰓I型PLA_2のみに反応するモノクローナル抗体を用い、免疫組織化学的手法により鰓組織におけるI型PLA_2の局在を検討する予定である。2. 魚類鰓組織中のPLA_2活性と殺菌活性の検索魚類の鰓組織中のPLA_2活性と殺菌活性との関係を比較検討することを目的として、タイ科魚類5種、ブリ、ヒラメ、シロザメ、コイ、ウナギ及びニジマスの鰓弁より抽出液を調製し、PLA_2活性並びにB.Subtilis,E.Coliに対する殺菌活性を測定した。その結果、マダイ以外の魚種の鰓組織中のPLA_2活性は低かったが、殺菌活性についてみると、シロザメ、ウナギ、ブリ並びにタイ科魚類5種の粗抽出液には極めて強い殺菌活性が存在し、いずれの抽出液とも15μgprotein/ml以下の濃度でB.Subtilis,E.Coliを50%以上殺菌した。一方、コイの粗抽出液はB.Subtilisに対する殺菌活性は認められたが、E.Coliに対する殺菌活性は認められず、ヒラメ、ニジマスの粗抽出液はいずれの菌に対しても抗菌活性を示さなかった。