空間マルチオミクスに向けたハイスループット光化学単離法の開発

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PIC法の原理をベースに、dsDNA置換後に末端にUV照射した細胞のみにアダプターライゲーションする新技術開発を行った。オリジナル法と異なり、ライゲーション部位に対して光開裂型ヌクレオチド(caged DNA)を配置した。アダプターは49塩基、末端を15塩基の粘着末端、二本鎖となる15塩基に固有配列をもち、15塩基の粘着末端にcaged DNAを4つ配置した。また、ライゲーションの反応順を記憶するユニークな塩基配列（図2下段：色付き部分）が一本鎖であるようデザインした。これは、ライゲーション後にdNTPや酵素を用いて二本鎖にする。まず3種類のアダプターを使用し、in vitroで筋組織より抽出したRNAと、96-well plateで培養細胞を用いて検証した。ＵＶ照射は、切片上の領域を大きくふたつに分けて、そこに含まれる細胞にUV照射を正確に行った。照射後に光開裂を生じた粘着末端は次のアダプターのライゲーションが可能であることを確認した。