病原性ウイルスを簡易定量可能な新規DNAアプタセンサーの迅速開発法の確立

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本年度は、当初計画していた研究について着手する順番を変更し、「獲得したDNAアプタマーを用いたアプタセンサー開発」から着手した。使用したDNAアプタマーは、これまでに選抜したレジオネラ細菌結合型DNAアプタマーと、細胞外小胞（sEV）結合型DNAアプタマーを用いた。シグナル物質は金ナノ粒子を使用し、金ナノ粒子表面にDNAアプタマーを修飾した金ナノ粒子プローブ溶液を作製した。レジオネラ細菌結合型DNAアプタマーを用いたアプタセンサーの開発では、諸条件の検討後にレジオネラ細菌の有無による金ナノ粒子の吸収スペクトル変化を観察した。試料中にレジオネラ細菌が存在しないと、AuNPsは凝集して青色になり、650 nmの波長付近に吸収スペクトルのピークが検出された。一方で試料中にレジオネラ細菌が存在すると、金ナノ粒子表面に修飾したDNAアプタマーがレジオネラ細菌と結合し、金ナノ粒子が分散を維持して赤色になり、520 nmの波長付近に吸収スペクトルのピークが検出された。従って、本法で試料中のレジオネラ細菌の有無を高感度かつ半定量的に分析できた。sEV結合型DNAアプタマーを用いたアプタセンサーの開発についても、レジオネラ細菌を標的としたアプタセンサーの構築と同様に実施した。しかしながら、本法はsEVが分散している培養液中に存在する血清由来のタンパク質によるバックグラウンド阻害を受けた。本研究の最終目標はウイルスを標的としたアプタセンサーの構築であり、ウイルスと共存する培養液中の共存タンパク質による阻害を受けることは予想できる。そのため、今後は共存するタンパク質によるバックグラウンド阻害を受けないセンサーの構築を実施する。