神経伝達物質の放出におけるRab3A-Rabphilin-3A系の機能と作用機構

Rab3A-Rabphilin-3A系统在神经递质释放中的功能和作用机制

• 批准号: 08680706
• 负责人: 白滝 博通
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08680706/
• 关键词: 神経伝達物質; Rab3A; Rabphilin-3A; Rab GDT; Rab3 GAP

私共の研究室では、神経伝達物質の放出反応における低分子量G蛋白質Rab3Aの活性化機構と作用機構について解析を進めており、Rab3Aの標的蛋白質としてC2様領域を2個有するRabphilin-3Aを見い出している。さらに、Rab3Aの活性制御蛋白質としてRab GDIを見い出している。本研究で、私共は、Rab3AのGTPase活性を促進する活性制御蛋白質Rab3 GAPをラット大脳より精製してcDNAをクローニングし、その一次構造を決定した。Rab3 GAPは、C末端に翻訳後脂質修飾を受けたRab3Aを含むRab3ファミリー全てに作用したが、その他のRabには作用しなかった。さらに、私共は、Rab3A-Rac GDI複合体に作用してRab3AをRab GDIから解離させる活性制御蛋白質Rab3A GDFをラットのシナプス小胞膜画分において同定し、種々のカラムクロマトグラムにて高度に精製した。Rab3A GDFは、熱処理およびトリプシン処理にて失活する蛋白分子であった。一方、私共は、Rabphilin-3AがRab3 GAPに抑制的に作用してRab3AをGTP結合型に保持することを明らかにしているが、本研究で、私共は、Rab3AのC末端の翻訳後脂質修飾部がシナプス小胞膜リン脂質に結合することにより、GTP-Rab3AからのGTPの解離が抑制されることを明らかにした。このことから、Rab3AはRabphilin-3Aと蛋白質-蛋白質結合すると共に、シナプス小胞膜リン脂質とlipid-lipid結合してシナプス小胞に局在し、GTP結合型に保持されている可能性が高くなった。このように、本研究は予想以上に進展し、当初の目的はほぼ完全に達成することができた。

Private の total laboratory で は, god 経 の 伝 of material released against 応 に お け る low molecular weight G protein Rab3A の activation mechanism と role に つ い て parsing を into め て お り, Rab3A の target protein と し て C2 を two others in field have す る Rabphilin - 3 - a を see い out し て い る. Youdaoplaceholder0, Rab3A <s:1> active control protein と て てRab GDIを see る output る て る る る. This study were は で and private Rab3A の GTPase activity を promote す る active suppression protein Rab3 GAP を ラ ッ ト big 脳 よ り refined し て cDNA を ク ロ ー ニ ン グ し, そ の a tectonic を decided し た. After は, C terminal に turn 訳 Rab3 GAP lipid modification を by け た Rab3A を containing む Rab3 フ ァ ミ リ ー full て に role し た が, そ の he の Rab に は role し な か っ た. さ ら に, private は, complex に Rab3A - Rac GDI し て Rab3A を Rab GDI か ら dissociation さ せ る active suppression protein Rab3A GDF を ラ ッ ト の シ ナ プ ス small cell membrane draw points に お い て with し, kind of 々 の カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ ム に て highly に refined し た. Rab3A GDF にて, thermal treatment およびトリプシ にて treatment にて inactivated する protein molecules であった. One party, private consortium が, Rabphilin-3AがRab3 GAP に inhibitory effect of the に し て Rab3A を GTP type combination made に keep す る こ と を Ming ら か に し て い る が, this study で, private は, Rab3A の end C の turn 訳 lipid modification after the が シ ナ プ ス small cell membrane リ ン lipid に combining す る こ と に よ り, GTP - made Rab3A か ら の GTP の solution made from が inhibit さ れ る こ と を Ming Youdaoplaceholder0 に に た. こ の こ と か ら, Rab3A は Rabphilin - 3 a と protein - protein す る と に, シ ナ プ ス small cell membrane リ ン lipid と lipid - lipid combined し て シ ナ プ ス vesicular に bureau in し, GTP type combined に made さ れ て い likely が る く な っ た. <s:1> ように ように, this study intends to make progress on the above に, and fully に achieve the original <s:1> goal ほぼ ほぼ に とがで とがで とがで た た た た た た た た た た た た た た た た た た た た た た た た た た

项目成果

Orita, S.: "Doc2 enhances Ca^<2+> -dependent exocytosis from PC12 cells." J. Biol. Chem.271. 7257-7260 (1996)

Orita, S.：“Doc2 增强 PC12 细胞的 Ca^2 依赖性胞吐作用。”

Matsuda,S.: "A membrane-associated GDP/GTP exchange protein specific for Rho small GTP-binding protein-Partial purification and characterization from rat brain." Oncogene. 12. 915-920 (1996)

Matsuda,S.：“一种针对 Rho 小 GTP 结合蛋白的膜相关 GDP/GTP 交换蛋白 - 来自大鼠脑的部分纯化和表征。”

Fujita,Y.: "Phosphorylation of Munc-18/n-Secl/rbSecl by protein kinase C-Its implication in regulating the interaction of Munc-18/n-Secl/rbSecl with Syntaxin." J.Biol.Chem.271. 7265-7268 (1996)

Fujita,Y.：“蛋白激酶 C 磷酸化 Munc-18/n-Secl/rbSecl——其在调节 Munc-18/n-Secl/rbSecl 与突触蛋白相互作用中的意义。”

Hirao, M.: "Regulation mechanism of ERM (Ezrin/Radixin/Moesin) protein/plasma membrane association-Possible involvement of phosphatidylinositol turnover and Rho-dependent signaling pathway." J. Cell. Biol.135. 37-51 (1996)

Hirao, M.：“ERM (Ezrin/Radixin/Moesin) 蛋白/质膜关联的调节机制 - 可能涉及磷脂酰肌醇周转和 Rho 依赖性信号通路。”

Shimizu, K.: "SMAP, an Smg GDS-associating protein having Arm repeats and phosphorylated by Src tyrosine kinase." J. Biol. Chem.271. 27013-27017 (1996)

Shimizu, K.：“SMAP，一种具有 Arm 重复并被 Src 酪氨酸激酶磷酸化的 Smg GDS 相关蛋白。”