新規種苗生産技術の開発に向けたメバル類雄主要尿タンパク質の産生機序と機能の解析

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本研究は、メバル類種苗生産の効率化を阻む、「雄成熟度判定の不確実性」と「雌親魚の卵巣発達不全」の問題の解決を目標として、メバル類雄主要尿タンパク質(リポカリン様タンパク質:LCN-lp、スリーフィンガープロテイン様タンパク質:TFP-lp)の産生機序の解析を実施した。クロソイ血清中から、家兎抗LCN-lp抗体と免疫交差性を示すタンパク質(LLP)が見出された。同タンパク質の酵素免疫測定法を開発し、メバル類(クロソイ・エゾメバル)の雄において血清中の濃度を測定した結果、同タンパク質濃度は生殖腺体指数との有意な正の相関が認められ、LLPの雄成熟度指標としての有効性が示唆された。また、雄性ホルモンin vivo投与試験ならびにLCN-lp遺伝子上流ゲノム領域のin vitro転写活性解析(レポーターアッセイ)から、LCN-lpが雄性ホルモンによって誘導されることが明らかとなった。この雄性ホルモンによるLCN-lp産生誘導機構の存在は、LLPおよびLCN-lpが雄成熟度を反映する現象を矛盾なく説明すると考えられた。次に、クロソイ腎臓を試料としたTFP-lpのcDNAクローニングを行った。その結果、複数のTFP-lpサブタイプ配列が得られた。今後qPCRによるTFP-lp mRNA測定系を確立するためには、これらサブタイプのグループ化とプライマー設計が必要だが、その基盤となる情報が得られた。予備的な飼育試験から、雄主要尿タンパク質の機能解析を目的とした試験(行動試験等)には、クロソイよりも、エゾメバルに適性があると考えられた。一方で、エゾメバルについては、雄主要尿タンパク質の性状は、不明であった。そこで、将来的な機能試験を見据えて、交尾期野生エゾメバル雌雄腎臓の網羅的遺伝子発現解析(RNA-seq)データを解析した。その結果、エゾメバルにおける雄主要尿タンパク質の配列が得られた。