ミオシン軽鎖交換による平滑筋収縮機構とカルポニンの生理的意義の解析

肌球蛋白轻链交换分析平滑肌收缩机制及钙调蛋白的生理意义

• 批准号: 09670102
• 负责人: 八木 忍
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Yamagata School of Health Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09670102/
• 关键词: 平滑筋; 単一平滑筋細胞; リン酸化; skinned cell; ミオシン軽鎖; カルポニン; サポニン; 哺乳類

平滑筋の収縮制御機構として最も有力なミオシンリン酸化説も、in vitroでは確立しているが、そのリン酸化が生筋の張力発生とどう連関するか未だ不明で、両者の量的解析が急がれている。本研究は、この不確かな点、リン酸化の程度と張力の関係について、2年間で、哺乳類の単一平滑筋での張力測定を含めた実験法を確立し、ミオシン制御軽鎖交換によってそれぞれ詳しく調べ、カルボニンの弛緩における生理的意義を検討することを目的としている。昨年度4月に異動したこともあり、実験室の整備に時間を要して当初予定したほどには進まなかったが、昨年度に引き続いて本年度まで、従来、両生類の胃の平滑筋で行われていた方法を哺乳類の平滑筋(主に血管平滑筋)に応用することにより、次のような成果があった。1. 単一平滑筋細胞の分離、測定系への固定保持:モルモットの大動脈、腸間膜動脈から酵素処理(コラーゲン、エラスターゼ)により単一細胞を作製。当初は酵素処理により、円形の細胞しか得られなかったが、酵素量、処理時間の調整により、次第に紡錘形をした平滑筋本来の形状の細胞が得られるようになった。張力測定のためには単一細胞の両端をマイクロマニピュレーターの操作で張力測定系に固定することが必要で、この点が最も困難を極めている。哺乳類の平滑筋は、両生類ガマ胃平滑筋よりも長径が短いため、測定系のブローブに巻きつけるという従来のやり方では難しい。そこで短い分、工夫をして、まだ十分ではないが、かなりの部分までの保持が可能になった。2. skinned cellの作製:分離した単一細胞の懸濁液をsaponin処理して膜透過性を高めたskinned cellを作製。収縮性を保持しにSkinned cellを作ることができた。3. カルボニンによる収縮抑制:カルボニンが平滑筋の静止状態を保つのに必要であることが分かった。現在、カルボニンの収縮に及ぼす影響についてさらに詳細に検討しているところである。

Smooth tendon contraction control mechanism is the most powerful, in vitro, to establish, in vitro, the tension generation of the tendon, in vitro, in vitro The purpose of this study is to establish a practical method for measuring the tension of a single smooth muscle in mammals over a period of two years due to this uncertainty, the relationship between the degree of acidification and tension, and to discuss the physiological significance of the detailed modulation and relaxation of the muscle during the exchange of the tendon. In April of last year, the preparation time of the laboratory was determined at the beginning, and the smooth muscle of the stomach of the patient was determined at the beginning. In April of last year, the smooth muscle of the stomach of the patient was determined at the beginning. 1. Isolation of single smooth muscle cells, determination of system fixation and maintenance: preparation of single cells by enzyme treatment of arterial and mesenteric arteries The first enzyme treatment is to adjust the enzyme amount, the treatment time and the spindle shape of the cells. Tensiometry is the most difficult way to operate a cell. Mammalian smooth muscle, It is possible to keep a short time, a long time, a long time. 2. Preparation of skinned cells: separation of a cell suspension by saponin treatment and preparation of skinned cells with high membrane permeability Skinned cells are kept intact. 3. Shrinkage suppression in kalponin: kalponin is necessary to maintain the static state of smooth muscles. Now, we're going to discuss in detail the impact of the recession.