異種移植に関わるα-1、3-ガラクトース糖鎖の免疫分子機能解析

异种移植中α-1,3-半乳糖糖链的免疫分子功能分析

• 批准号: 10134207
• 负责人: 櫛 泰典
• 金额: $ 1.09万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10134207/
• 关键词: 異種移植; α-1、3-ガラクトース; ガラクトシルトランスフェラーゼ; 糖転移酵素

ブタの臓器をヒトに移植するいわゆる異種移植を臨床の場で応用する研究が急速に進展してきている.この背景には深刻な臓器提供者不足の問題が生じていることが最大の理由である.我々の研究は異種移植における最も深刻な問題である超急性拒絶反応を回避するために、ヒト血清中に存在する自然抗体が認識するブタ臓器に発現している抗原を制御する新規かつ効率的な方法を生化学的及び分子生物学的手法により確立することを目的とした.1、ヒトに存在する自然抗体により認識される糖鎖抗原の解析.ブタ血管内皮由来細胞株よりα1-3ガラクトース糖鎖抗原を有する糖脂質、糖タンパク質の構造を生化学的手法により明かにした.糖脂質の構造では中性糖脂質と酸性糖脂質合わせて数種を分離、精製し、ガスクロマトによる成分分析,質量分析計による分子イオンの測定を行い、合わせて2種のLe^xを含む新規構造を明かにした.これらの得られた数種の糖鎖構造を用いてヒトの自然抗体でどのα1-3ガラクトース糖鎖抗原が強く親和性をしめすか検討を行っている.2、α1-3ガラクトース糖鎖抗原を有する糖タンパク質の構造解析.ブタ血管内皮由来細胞株(PK-15)より膜画分を調製し、α1-3ガラクトースに親和性を持つレタチンカラムを用いて糖タンパク質の精製を試みた.その結果、120kDに分子量を持ち、α1-3ガラクトース糖鎖を有する糖タンパク質が精製された.目下この糖タンパク質の一次構造解析のために気層のアミノ酸配列決定装置を用いてその構造解析を行っている.現在得られたアミノ酸配列と今まで知られている既知の配列をデータベースで調べると報告されていない糖タンパク質であることが示唆されたので、現在その配列を再度、いくつかのペプチドに分解して再検討を行っている.3、α1-3ガラクトース糖鎖抗原の発現抑制.PK-15細胞のα1-3ガラクトース糖鎖抗原を合成するα1-3ガラクトース転移酵素のcDNAを基にいくつかのアンチセンスオリゴDNAを合成した.これをPK-15細胞と協培養すると特定のアンチセンスオリゴDNAがα1-3ガラクトース糖鎖抗原の発現を抑制することがあきらかになり、同時に効果があったアンチセンスオリゴDNAがその後のヒト血清との反応に於で処理しない、あるいは効果のないものと比較して、結合が抑嗣されることが明かになった.このことは血清に含まれる自然抗体がα1-3ガラクトース転移酵素のアンチセンスオリゴDNAにより反応が抑制されたことを示している.現在効果があった箇所を含む更に長いアンチセンスDNAを作製し,これを発現ベクターに組み込み、この細胞にトランスフエクトし、α1-3ガラクトース糖鎖抗原の発現を恒久的に抑制したクローンを作製、選択している.1から3まで現在、研究を並行して行っており、得られたを考慮して今後更に異種移植実現に向けて精力的に研究に取り組みたい.

The study of xenotransplantation in the clinical field is progressing rapidly. This background is the biggest reason for the lack of deep equipment providers. Our research has addressed the most profound problems in xenotransplantation, including the avoidance of hyperacute rejection, the identification of natural antibodies in serum, the detection of antigens, the identification of new effective methods, biochemical and molecular biological methods, and the identification of glycan antigens. The structure and biochemical methods of glycopolipid and glycopeptide in vascular endothelium-derived cell lines α1-3 and α1-3 are clearly described. The structure of sugar lipid is composed of neutral sugar lipid and acid sugar lipid. Several kinds of sugar lipid are separated, refined, purified, analyzed, mass analyzed, determined, and synthesized. The α1-3 glucuronidase antigen obtained from natural antibodies using several glucuronidase structures has a strong affinity for this antigen. 2. Structural analysis of the glucuronidase protein produced by the α1 - 3 glucuronidase antigen. The vascular endothelium-derived cell line (PK-15) was used to modulate the membrane composition, α1-3, affinity, affinity, and purification of sugar. The results show that the molecular weight of 120kD is different, α1-3 is different, and the sugar chain is different. The present invention relates to a method for determining the acid alignment of a sugar compound by using a first structural analysis and a second structural analysis. Now we know that the allocation of the acid has been changed, and now we know that the allocation of the known acid has been changed, and now we know that the allocation of the sugar has been changed, and now we have been changed. Inhibition of α1 - 3 Glycolocked Antigen Production. α1 - 3 Glycolocked Antigen Synthesis in PK-15 Cells. The PK-15 cells were cultured in a specific manner to inhibit the production of α1-3 glycogen, while the PK-15 cells were cultured in a specific manner to inhibit the production of α1-3 glycogen. The serum contains natural antibodies to α1-3, which are responsible for the inhibition of DNA transfer. Now, as a result, all of them are contained in the long chain of DNA production, which has led to the discovery of a group of genes, cell types, α1-3 genes, and the permanent inhibition of the production of glycan antigens. We need to consider the possibility of further xenotransplantation in the future.

项目成果

Yamamoto,H.,Iida-Tanaka,N.,Kasama,T.,Ishizuka,I.,Kushi,Y.,Handa,S.: "Isolation and characterization of a Novel Forssman active" J.Biochem.(印刷中).

Yamamoto, H.、Iida-Tanaka, N.、Kasama, T.、Ishizuka, I.、Kushi, Y.、Handa, S.：“新型 Forssman 活性物质的分离和表征”J.Biochem。 。

櫛 泰典: "生化学辞典(第3版)分担" 東京化学同人, 1658 (1998)

栉靖典：《生物化学词典（第3版）》东京化学同人，1658（1998）

Taguchi,A.,Arita,M.,Kushi,Y.,Handa,S.: "Suppression of Galα1-3Gal expression by antisense oligonucleotides specific for porcine α-1,3-galactosyltramferarm." Proceeding of the Japan Academy. 74. 149-154 (1998)

Taguchi, A.、Arita, M.、Kushi, Y.、Handa, S.：“猪 α-1,3-半乳糖基转移臂特异性反义寡核苷酸对 Galα1-3Gal 表达的抑制”，《日本学院学报》74。 149-154 (1998)

Watarai,S.,Tana,T.,Kushi,Y.,Kodama,H.: "Sensitive detection of Hanganutziu-peicheractive gangliosid N-glycolylneuraminicacid-containing gangliosides,in sera of colon cancer,patient using lioposl m c assay" Appl.Biol.Sci.4(印刷中).

Watarai, S.、Tana, T.、Kushi, Y.、Kodama, H.：“使用 lioposl m c 测定法对结肠癌患者血清中的 Hanganutziu-peicheractive 神经节苷脂 N-羟氨酰神经氨酸含神经节苷脂进行灵敏检测” Appl.Biol .Sci.4（印刷中）。

Asakawa,H.,Kubota,T.,Kushi,Y.,Teramura,Y.,Hino.K.,Usui,M.,Kurimoto,M.,Mori,W.: "A sudy on epltope for a monoclonal antibody to HeLa cell fericin" 医学のあゆみ. 182. 923-924 (1997)

Asakawa, H.、Kubota, T.、Kushi, Y.、Teramura, Y.、Hino K.、Usui, M.、Kurimoto, M.、Mori, W.：“单克隆抗体表位的研究HeLa 细胞铁蛋白”医学史。182. 923-924 (1997)