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コレラ菌の鉄代謝機構の解明とその阻害による創薬への応用

阐明霍乱弧菌的铁代谢机制及其抑制药物发现

基本信息

批准号：
13J04076
负责人：
関根由可里
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J04076/
关键词：
ヘムヘム輸送タンパク質ヘム分解酵素相互作用 X線結晶構造解析共鳴ラマン分光法表面プラズモン共鳴ヘム輸送体紫外可視吸収分光法ラマン分光法ヘム蛋白質反応機構反応中間体酸素活性化共鳴ラマン結晶構造解析

项目摘要

昨年までの研究により、HutZ がヘム分解酵素であり、ヘムの周辺構造が酵素活性を制御していることが明らかになったが、 HutZ がどのように基質であるヘムを獲得するかは不明であった。そこで、hutZ 周辺遺伝子を探索したところ、hutX が hutZ とオペロンを形成しており、遺伝子解析により HutX はヘム輸送蛋白質と予測された。そこで本年度は、 HutX によるヘム輸送および HutZ 活性化能を検討した。HutX のヘム輸送蛋白質としてのヘム結合様式を検討するため、ヘム滴定を行ったところ、HutX とヘムは 1:1 で結合し、X 線結晶構造解析と共鳴ラマン分光法から、ヘムは Tyr90 に配位することが明らかとなった。しかし、 HutXのヘム解離定数Kdは7.4 nMと見積もられ、これはHutZのKdと同程度であることから、Kdの値の比較からは HutZ へのヘム輸送は確認できなかった。そこで、HutX のヘム結合体と HutZ を混合させ、その紫外可視吸収スペクトルの変化を追跡したところ、極大吸収波長がHutXのヘム由来の390 nmからHutZのヘム由来の 412 nm に変化し、ヘムが HutX から HutZ へ輸送されることが確認され、表面プラズモン共鳴の結果から、HutX と HutZ は相互作用し、ヘムの輸送を行っていることが明らかとなった。そこで、過酸化水素添加による HutZ のヘム分解活性を測定してみると、HutX から HutZ に輸送されたヘムも分解された。以上のことから、HutX は HutZ と相互作用し、ヘムを受け渡すヘム輸送蛋白質であることが明らかとなった。

Last year's research showed that HutZ had a high level of enzyme activity and a low level of enzyme activity. HutX, HutZ, HutX, HutX, HutZ, Hut This year, HutX and HutZ activated energy were discussed. HutX is a protein transporter. It is a protein transporter. HutX's dissociation constant Kd is 7.4 nM, and HutZ's dissociation constant Kd is 7.4 nM, and HutZ's dissociation constant Kd is 7.4 nM. HutX and HutZ are mixed, UV visible absorption spectra change, maximum absorption wavelength 390 nm from HutX to HutZ at 412 nm, HutX and HutZ transport spectra change, surface resonance spectra change, HutX and HutZ interact. The transmission of the signal was delayed. The decomposition activity of HutZ was determined by adding H2O, H2O and H2O. HutX and HutZ interact with each other and transport proteins.