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ランダム変異導入法を利用した消化管内での生存に関わるビフィズス菌遺伝子の特定

使用随机诱变方法鉴定参与胃肠道存活的双歧杆菌基因

基本信息

批准号：
13J02323
负责人：
阪中幹祥
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-26 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は，以下に示す2種類のランダム変異導入系をビフィズス菌において確立した．1. TLS143を用いたビフィズス菌のランダム変異導入系の確立:Bifidobacterium longum由来の転移因子TLS143を用いてビフィズス菌ゲノムへのランダム変異導入を行った．はじめに，TLS143の転移酵素を発現可能なベクターをB. longum 105-Aに導入した．その後，作出した株にTLS143のトランスポゾンを含むベクターを導入した．結果として，トランスポゾンがゲノム上に転移したB. longum株を最大10の3乗 CFU/μg DNAの効率で取得できた．トランスポゾンはB. longumゲノム上の様々な部位に転移していた．以上の結果より，これまで困難であったビフィズス菌のランダム変異導入系を開発することに成功した．さらに，上記の実験系により取得したα-グルコシダーゼ遺伝子欠損株の性状を解析した．その結果，今回欠損したα-グルコシダーゼ遺伝子はB. longumのパラチノースおよびトレハロースの資化に重要な役割を担っていることが示された．これはビフィズス菌の消化管内生存戦略を理解する上で重要な知見になると考えられる．2. Himar1を用いたビフィズス菌のランダム変異導入系の確立:種々の細菌種の変異導入系に応用されている転移因子Himar1（ノサシバエ由来）を用いてビフィズス菌ゲノムへのランダム変異導入を行った．はじめに，Himar1のトランスポゾンと転移酵素遺伝子を連結した温度感受性複製ベクターをB. longum 105-Aに導入した．その後，この株内でHimar1の転移酵素を恒常的に発現させた．その結果，Himar1のトランスポゾンがゲノム上に転移したB. longum株を取得することに成功した．Himar1はビフィズス菌のランダム変異導入に有用であることが示された．

This year, the following shows that the system is registered. 1. TLS143 is used to make sure that the system is registered. 1. The transfer factor TLS143 is used to make sure that the transfer factor TLS143 is registered in the bank. It is now possible for TLS143 to transfer enzymes to B. longum 105. After the introduction of the enzyme, a strain of TLS143 was made. This is the first time that a maximum of 10: 3 CFU/