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善玉コレステロール（ＨＤＬ）形成におけるヒトＡＢＣＡ１の細胞外ドメインの機能解析

人ABCA1胞外结构域在好胆固醇（HDL）形成中的功能分析

基本信息

批准号：
13J02851
负责人：
石神正登
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J02851/
关键词：
ABCトランスポーター ABCA1 善玉コレステロール HDL コレステロール ABCAl リン脂質ダイマー化

项目摘要

これまでに、予備的な実験により、ABCA1発現細胞をトリプシン処理すると、ABCA1の細胞外ドメインが切断されていると同時に、培地中にコレステロールが放出されることを見出した。この結果は、ABCA1の細胞外ドメイン内に、輸送されたコレステロールが蓄積していることを示唆している。一方で、全反射蛍光（TIRF）顕微鏡を用いた解析により、ABCA1はHDL産生途上で一時的にダイマー化し、細胞膜上で停止するという特異的な挙動を示すことが明らかとなった。以上のことから、ABCA1はATP加水分解に伴ってコレステロールを輸送し、細胞外ドメイン内に溜め込むとともにダイマー化するという仮説をたて、ABCA1のダイマー化の生理的意義を明らかにすることを目的として研究を進めた。ABCA1と最もアミノ酸配列相同性の高いタンパク質であるABCA7をTIRF顕微鏡で観察したところ、ABCA7はABCA1とは異なり細胞膜上を自由拡散することがわかった。ABCA7とのアミノ酸配列の比較から、ABCA1のダイマー化に関わるドメインを探索し、C末端付近の3つのロイシン残基をすべてアラニンに置換した結果、ダイマー化しないABCA1変異体であるABCA1-3LAの作製に成功した。その後、Alexa蛍光色素を付加したapoA-IとBODIPY蛍光団を付加したコレステロールを用いた蛍光ゲル濾過クロマトグラフィー解析により、ABCA1はサイズの異なる2種類のHDLを産生する一方で、ABCA1-3LAは小さいサイズのHDLを主に産生することを示した。以上の結果から、ABCA1のダイマー化は大きいサイズのHDLの産生に必要であることが示唆された。以上の結果は、HDL産生におけるABCA1のダイマー化の意義を初めて明らかにしたものである。

これまでに、Prepared な実験により、ABCA1発appearance cell をトリプシン treatment すると、ABCA1の fine The extracellular ドメインがcuts off the されているとsimultaneousに, and the inside にコレステロールが releases the されることを见出した.このRESULTは、ABCA1のEXTRACELLULAR ドメイン内に、TRANSPORT されたコレステロールがACCUMULATION していることを Show 唆している. One side, total reflection light (TIRF) micromirror is used for analysis, and ABCA1 is used for HDL generation. Temporary にダイマー化し, stop するという on the cell membrane, specific な动を见すことが明らかとなった. Above, ABCA1, ATP hydrolysis, transport, extracellular transportダイマー化するという仮说をたて、ABCA1のダイマー化のphysiological significance を明らかにすることをpurpose として research を Advance めた. ABCA1 is the most homogeneous acid composition and has high quality, and ABCA7 is a TIRF micromirror. Observe the したところ, ABCA7はABCA1とはisoなりをfreely spread on the cell membrane することがわかった. Comparison of ABCA7 とのアミノ acid arrangement, ABCA1 のダイマー化に关わるドメインをExploration, C-terminal close 3つのロイシThe results of substitution of ン residue をすべてアラニンに and ダイマー化しないABCA1 variant であるABCA1-3LA were successfully produced.その后、Alexa荍光pigmentをFUKAしたapoA-IとBODIPY荍光団をpaid加したコレステロールを Filtered by いた蛍光ゲルクロマトグラフィーanalysisにより、ABCA1はサイズのdifferentなる2 kinds of HDLをproducedする一一で、 ABCA1-3LAは小さいサイズのHDLを主にproducesすることをshowした. The results of the above are the same as those of ABCA1's high-definition HDL. As a result of the above, HDL generates ABCA1's original meaning.