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善玉コレステロール（ＨＤＬ）形成におけるヒトＡＢＣＡ１の細胞外ドメインの機能解析

人ABCA1胞外结构域在好胆固醇（HDL）形成中的功能分析

基本信息

批准号：
13J02851
负责人：
石神正登
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J02851/
关键词：
ABCトランスポーター ABCA1 善玉コレステロール HDL コレステロール ABCAl リン脂質ダイマー化

项目摘要

これまでに、予備的な実験により、ABCA1発現細胞をトリプシン処理すると、ABCA1の細胞外ドメインが切断されていると同時に、培地中にコレステロールが放出されることを見出した。この結果は、ABCA1の細胞外ドメイン内に、輸送されたコレステロールが蓄積していることを示唆している。一方で、全反射蛍光（TIRF）顕微鏡を用いた解析により、ABCA1はHDL産生途上で一時的にダイマー化し、細胞膜上で停止するという特異的な挙動を示すことが明らかとなった。以上のことから、ABCA1はATP加水分解に伴ってコレステロールを輸送し、細胞外ドメイン内に溜め込むとともにダイマー化するという仮説をたて、ABCA1のダイマー化の生理的意義を明らかにすることを目的として研究を進めた。ABCA1と最もアミノ酸配列相同性の高いタンパク質であるABCA7をTIRF顕微鏡で観察したところ、ABCA7はABCA1とは異なり細胞膜上を自由拡散することがわかった。ABCA7とのアミノ酸配列の比較から、ABCA1のダイマー化に関わるドメインを探索し、C末端付近の3つのロイシン残基をすべてアラニンに置換した結果、ダイマー化しないABCA1変異体であるABCA1-3LAの作製に成功した。その後、Alexa蛍光色素を付加したapoA-IとBODIPY蛍光団を付加したコレステロールを用いた蛍光ゲル濾過クロマトグラフィー解析により、ABCA1はサイズの異なる2種類のHDLを産生する一方で、ABCA1-3LAは小さいサイズのHDLを主に産生することを示した。以上の結果から、ABCA1のダイマー化は大きいサイズのHDLの産生に必要であることが示唆された。以上の結果は、HDL産生におけるABCA1のダイマー化の意義を初めて明らかにしたものである。

In the same time as the equipment, the equipment, the ABCA1, the cell, the ABCA1, the extracellular device, the device, the device, the The results show that the ABCA1 is responsible for both extracellular and internal diseases, and that it is necessary to save the data and instigate it. One side, total reflection light (TIRF) micrometer is used to analyze the signal, the ABCA1 HDL is used for the first time on the way to life, and the device on the cell membrane is activated to show that the device is sensitive. The meaning of the physiology of ABCA1, ABCA1, ATP and water decomposition is related to the improvement of the physiology in order to improve the physiology. The homogeneity of ABCA1, TIRF, ABCA7, ABCA1 and ABCA1 in the cell membrane were observed in this paper. The ABCA7 antisense acid was arranged in a series of experiments, such as ABCA1, ABCA1, chemical, chemical After that, the Alexa light pigments were added to the apoA-I BODIPY light source. In the first place, the ABCA1-3LA system was used to improve the performance of the HDL system. In this way, the ABCA1-3LA system is used to analyze the information in the HDL system, which is the main part of the system. As a result of the above results, it is necessary for ABCA1 to inform you that it is necessary to instigate an increase in HDL health. The above results show that HDL is responsible for the development of ABCA1 information in the first place.