INTERACTIONS BETWEEN CA & CAMP REGULATION IN MYOCYTES
CA 之间的互动
基本信息
- 批准号:2029291
- 负责人:
- 金额:$ 21.95万
- 依托单位:
- 依托单位国家:美国
- 项目类别:
- 财政年份:1997
- 资助国家:美国
- 起止时间:1997-04-01 至 2000-03-31
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
This is a proposal to examine the role of Ca in regulating adenylyl
cyclase(AC) activity in chick cardiac myocytes. Evidence is presented
that the myocytes express type V nd VI AC isoforms, both of which are
inhibited by Ca. The PI has found that lowering external Ca stimulates
cAMP production in response to either ISO or forskolin. The applicant
proposes to identify the AC isoforms at the protein level using isoform-
specific antibodies, and to alter expression levels of types V and VI
isozymes in embryonic chick heart myocytes using adenovirus-mediated
expression techniques (sense or antisense), an to examine the effects of
these alterations on the Ca-AC interaction. AC activities will be
measured in myocytes expressing known levels of AC V and VI, and the
effects of Ca will be measured in intact cells (variations in
extracellular Ca+/- nifedipine), in permeabilized cells and in isolated
membranes. The second specific aim will focus on the long term effects of
exposure to Ca channel blockers on myocyte AC levels, using a CRE-
luciferase reporter construct, to assess cellular cAMP levels. The third
specific aim will investigate potential phosphorylation of th AC isoforms
by PKA and PKC, and associated effects on activity levels and the"cross-
talk" between Ca and cAMP production.
这是一个建议,检查钙调节腺苷酸的作用,
鸡心肌细胞环化酶(AC)活性。 所提交的证据
心肌细胞表达V型和VI型AC亚型,这两种亚型都是
抑制Ca。 PI发现,降低外部钙刺激
cAMP的产生响应于ISO或毛喉素。 申请人
建议在蛋白质水平上使用同种型-
特异性抗体,并改变V型和VI型的表达水平
腺病毒介导的鸡胚心肌细胞同工酶
表达技术(正义或反义),并检查
这些变化对Ca-AC相互作用的影响。 AC活动将
在表达已知水平的AC V和VI的肌细胞中测量,
将在完整细胞中测量Ca的影响(在细胞中的变化)。
细胞外Ca+/-硝苯地平),透化细胞和分离的
膜。 第二个具体目标将侧重于长期影响,
暴露于Ca通道阻滞剂对肌细胞AC水平的影响,使用CRE-
荧光素酶报告基因构建体,以评估细胞cAMP水平。 第三
具体目将研究AC同种型的潜在磷酸化
通过PKA和PKC,以及对活动水平和“交叉-
Ca与cAMP生成之间的“对话”。
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
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