Sécrétion des protéines chez les streptomycètes

链霉菌蛋白质的分泌

• 批准号: 262-2006
• 负责人: Morosoli, Rolf
• 金额: $ 1.46万
• 依托单位: Institut national de la recherche scientifique
• 依托单位国家: 加拿大
• 项目类别: Discovery Grants Program - Individual
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 加拿大
• 起止时间: 2006-01-01 至 2007-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://www.nserc-crsng.gc.ca/ase-oro/Details-Detailles_eng.asp?id=337048
• 关键词: cr; tion; des; prot; ines

Projet. Sécrétion des protéines chez les Streptomycètes Présents dans le sol, les Streptomycètes sécrètent de nombreuses enzymes leur permettant de dégrader une variété de substrats qui assurent en retour leur survie dans un environnement complexe en perpétuel changement. Chez la plupart des bactéries, la majorité des protéines sont sécrétées par le système général de sécrétion Sec. Ce système sécrète des protéines non repliées mais qui vont acquérir leur repliement final après sécrétion. Un nouveau système de sécrétion a été décrit soit le système Tat qui sécrète des protéines déjà repliées dans le cytoplasme. Une analyse informatique a prédit que Streptomyces coelicolor, dont la séquence génomique est connue, contient la plus grande quantité de protéines sécrétées par le système Tat parmi les 84 génomes bactériens analysés. Pas moins de 129 protéines susceptibles d'être sécrétées par ce système ont été prédites en se basant sur les caractéristiques du peptide signal principalement sur la présence invariable d'un doublet arginine à l'intérieur d'une séquence consensus S/TRRXFLK dans laquelle les autres résidus sont présents avec une très haute fréquence. Cependant ces prédictions ont une valeur limitée si elles ne sont pas validées par des études biochimiques. Nous disposons d'un mutant du gène tatC qui code pour une protéine essentielle au fonctionnement du système de sécrétion Tat dans Streptomyces lividans un très proche parent de S. coelicolor (par exemple les gènes tat des deux souches ont 96.6% d'homologie entre eux). Cette mutation empêche la sécrétion de la xylanase C une protéine exclusivement Tat-dépendante. Ainsi, les résultats acquis avec S. lividans peuvent être transposés chez S. coelicolor. Un mutant ΔtatC de S.coelicolor sera construit.  En séparant les protéines du surnageant de culture de S. coelicolor, dans la souche normale et mutée par électrophorèse sur gel en deux dimensions, suivi d'une analyse des protéines par spectrométrie de masse, il sera possible de mettre en évidence des protéines spécifiquement sécrétées par le système Tat et qui devraient normalement être absentes du mutant ΔtatC. Le choix des substrats de croissance pour la bactérie sera déterminant puisque certaines protéines sont induites seulement en présence d'un substrat spécifique. De plus, certaines protéines Tat-dépendantes sont des constituantes de la membrane cytoplasmique et de la paroi cellulaire, donc ces deux fractions seront elles aussi analysées par les mêmes méthodes. La mutation du gène tatC n'est pas létale ce qui suggère que les protéines Tat-dépendantes ne sont pas essentielles à la survie de la souche. Il se peut aussi que la sécrétion de ces dernières soient redirigées vers le système Sec et sécrétées d'une manière certes moins efficace, mais néanmoins suffisante pour assurer la survie de la souche. La distribution des protéines Tat-dépendantes au cours de la croissance sera analysée et comparée à celle des protéines Sec-dépendantes dont il est généralement admis qu'elles sont sécrétées à la fin de la phase exponentielle et en début de phase stationnaire. Le mutant ΔtatC pousse de façon dispersée alors que la souche sauvage forme des agrégats en milieu liquide, d'autre part les cellules du mutant sont plus fragiles que celles de la souche sauvage indiquant que quelques protéines structurelles Tat-dépendantes sont absentes de la membrane et de la paroi cellulaire du mutant. L'analyse des protéines de ces deux fractions permettra peut-être d'en identifier quelques unes responsables du phénotype observé chez le mutant ΔtatC.

项目在溶液中对现有链霉菌的蛋白质进行分离，这些链霉菌分离出的各种酶可透过降解的各种底物，这些底物可在持续变化的培养基中存活。在细菌的大部分中，蛋白质的大多数是通过第二节的一般性系统确定的。蛋白质安全系统不提供任何补充迈斯，但在安全之后，必须获得最终补充。一个新的分泌系统可以检测到达特分泌细胞质中的蛋白质。通过对84株天蓝色链霉菌的染色体组进行分析，发现该链霉菌在达特系统中的染色体组蛋白含量较高。此外，129种蛋白质可通过该系统获得，这些蛋白质主要基于肽信号的特征，即在其他反应体系中存在一个具有高度频率的共识S/TRRXFLK序列中存在一个不变性的精氨酸双峰。尽管这些预测有一个价值限制，但生物化学研究并不认可。我们对变铅青链霉菌（Streptomyceslividans）中一个编码达特分泌系统必需蛋白Au的突变体进行了处理。coelicolor（par aple les gènes达特des deux souches ont 96.6% d'homologie entre eux）.该突变导致木聚糖酶C的蛋白质排他性依赖于Tat。Ainsi，les résultats acquis avec S.在S.天蓝色。Un mutant ΔtatC de S.coelicolor sera purified. En éparant les Protéines du surnageant de S. coelicolor，dans la souche normale et mutée par électrophorèse sur gel en deux dimensions，suivi d'une analysis des protéines par spectrometrie de pacliterol，il sera possible de mettre en évidence des protéines spécifiquement sécrétées par le système达特特et qui devraient normalement être absentes du mutant ΔtatC.选择用于细菌生长的基质，确定某些蛋白质，并在存在特定基质的情况下进行诱导。此外，某些蛋白质Tat依赖于细胞质膜和细胞壁的组成，这两种组分也可通过相同的方法进行分析。基因突变并不意味着依赖于塔特的蛋白质对灵魂的生存并不重要。它还可能使最后一次选举重新指导安全和保障制度，其中许多制度肯定更有效，但迈斯不足以保证生存。通过对Au courses de la crosissance中Tat-dependantes的分布进行分析和比较，发现Sch-dependantes的策勒一般在指数相末和静止相初都是稳定的。突变体ΔtatC在液体环境中形成农作物种子，其表面分散，突变体细胞的另一部分是脆弱的，这些脆弱的种子细胞的细胞结构表明，突变体的膜和细胞壁上没有依赖于Tat的蛋白质。通过分析这两个组分的蛋白质，可以鉴定出突变体ΔtatC的表型。