Régulations et fonctions de l'endonucléase DFF chez les cellules saines et en apoptoses

细胞凋亡和细胞凋亡中核酸内切酶 DFF 的调节和功能

• 批准号: RGPIN-2015-04870
• 负责人: Bernier, Jacques
• 金额: $ 2.19万
• 依托单位: Institut national de la recherche scientifique
• 依托单位国家: 加拿大
• 项目类别: Discovery Grants Program - Individual
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 加拿大
• 起止时间: 2018-01-01 至 2019-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://www.nserc-crsng.gc.ca/ase-oro/Details-Detailles_eng.asp?id=645309
• 关键词: gulations; et; fonctions; de; endonucl

L'apoptose est nécessaire au développement et au maintien du bon fonctionnement de tout organisme vivant. Dans l'étape finale de l'apoptose, il y a fragmentation de l'ADN et formation de corps apoptotiques. Le DFF (DNA fragmentation factor) est la principale endonucléase impliquée dans l'apoptose. Le DFF réside dans le noyau ou le cytoplasme sous forme d'hétérodimère composé d'une chaperonne de 45 kDa (DFF45) à activité inhibitrice et d'une sous unité endonucléase latente de 40 kDa (DFF40). Nos travaux ont permis d'établir qu'il existe en aval de la caspase-3 un ou plusieurs mécanismes de régulation de l'activité du DFF40. Ce point de contrôle de l'apoptose nucléaire est peu étudié et représenterait un moyen de protection contre une activation accidentelle du DFF. L'objectif de ce programme de recherche est de caractériser comment est régulée l'endonucléase DFF impliquée dans la fragmentation de l'ADN lors de l'apoptose. Les objectifs à court terme sont : I) de caractériser les changements post-traductionnels que subissent les sous-unités du DFF chez les cellules en prolifération et en apoptose, II) de déterminer les enzymes et voies de signalisation impliquées dans les modifications post-traductionnelles, III) d'établir d'autres fonctions physiologiques du DFF. Des lignées de cellules lymphoïdes et neuronales susceptibles ou résistantes à la fragmentation de l'ADN seront utilisées. Dans un premier temps, l'importance des changements post-traductionnels des sous-unités du DFF dans la régulation des événements nucléaires impliqués dans l'apoptose sera déterminée. A partir de fractions cellulaires et nucléaires obtenues de cellule en prolifération ou en état d'apoptose, nous déterminerons la présence de résidus phosphorylés ou acétylés ou O-glycosylés sur le DFF45 et le DFF40. Selon les résultats obtenus, des expériences de mutagenèse dirigée seront utilisées afin de cibler l'importance de ces modifications post-traductionnelles sur l'activité de cette endonucléase. II) L'activation des voies biochimiques associées à des changements post-traductionnels de certaines protéines peut représenter un autre niveau de contrôle de l'activité du DFF. Tirant profit de l'absence d'apoptose nucléaire dans les révertants naturels dans nos deux modèles cellulaires, nous proposons une analyse comparative des voies de signalisation cellulaire. Ce dernier type d'analyse nous permettra d'associer les modifications de certaines voies signalétiques et l'absence d'apoptose nucléaire. III) Déterminer le rôle du  DFF dans d'autres fonctions physiologiques. Nous proposons de déterminer l'importance du DFF40 dans la différenciation cellulaire et de déterminer son importance au niveau mitochondrial. Ce projet de recherche a une importance cruciale afin de comprendre l'apoptose nucléaire et les fonctions de la protéine DFF.**

细胞凋亡试验表明，细胞凋亡与细胞发育、细胞功能的维持有关。当细胞凋亡结束时，细胞会分裂成细胞凋亡团。DNA断裂因子（DNA fragmentation factor， DFF）是主要的核酸内切酶（endoonuclsamicase impliqusamicase）和细胞凋亡。将DFF型胞质与DFF型胞质结合，将DFF型胞质与DFF型胞质结合，将DFF型胞质与DFF型胞质结合，将DFF型胞质与DFF型胞质结合，将DFF型胞质结合，将DFF型胞质结合，将DFF型胞质结合。没有任何一件事是不允许任何一件事是不允许任何一件事是不允许任何一件事是不允许任何一件事是不允许任何一件事是不允许任何一件事是不允许的。Ce point de contrôle de l'凋亡核的胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质胞质。L的用处ce计划de矫揉造作的est de caracteriser评论est regulee L 'endonuclease DFF impliquee在分裂de L 'ADN当时de L 'apoptose。这些目标是：1)将细胞的增殖、细胞的增殖、细胞的凋亡、细胞的细胞的增殖、细胞的增殖、细胞的凋亡、细胞的细胞的增殖、细胞的增殖、细胞的增殖、细胞的凋亡、细胞的信号转导、细胞的增殖、细胞的增殖、细胞的凋亡、细胞的功能、生理的变化、细胞的功能和生理的变化。细胞的胞质变性lymphoïdes和神经细胞的变性易受细胞的变性影响；细胞的变性易受细胞的变性易受细胞的变性。在首要条件下，“重要性”指的是后传统模式下的变化，即“单位”、“DFF”、“调节”、“核”、“隐含”、“细胞”和“终止”。细胞胞质和细胞核胞质分别得到细胞胞质增殖、胞质胞质凋亡、胞质胞质胞质增殖、胞质胞质胞质凋亡、胞质胞质胞质胞质磷酸化、胞质胞质胞质胞质胞质、o -糖基胞质胞质胞质、DFF45和DFF40。在其他情况下，如：变异后的变性，变性后的变性，变性后的变性，变性后的变性，变性后的变性，变性后的变性，变性后的变性，变性后的变性，变性后的变性。（二）激活生物化学相关的蛋白质，与传统技术相关的蛋白质，与传统技术相关的蛋白质，与传统技术相关的蛋白质，与传统技术相关的蛋白质，与传统技术相关的蛋白质，与传统技术相关的蛋白质，与传统技术相关的蛋白质，与传统技术相关的蛋白质，与传统技术相关的蛋白质。在分析细胞信号化细胞的比较特征的基础上，提出了一种新的方法来分析细胞信号化细胞的特征。cedennier型d‘analyse - ous - permeto - associer - les修饰-某些声音信号-胞嘧啶和l’缺失-胞嘧啶凋亡-胞嘧啶。（三）ddff dans d'autres functions physiologiques。目前已有的观点认为，DFF40的重要性与DFF40的重要性有关，而细胞质的重要性与线粒体的重要性有关。本课题的研究是理解细胞凋亡核胞嘧啶和蛋白胞嘧啶DFF的功能的一个重要关键