硫化氢调节HRI活性并与应激信号交互作用的机制

课题组前期以EcDOS PAS为研究对象，光谱学方法发现（1）Met95和Arg97均是硫化氢与其作用过程中的关键结合位点，它们的突变会改变硫化氢与血红素的结合，产生新的反应；（2）R97A PAS和R97I PAS突变体加入硫化氢之后生成了血红素的修饰物verdoheme，具有血红素加氧酶的功能；（3）硫化氢不与M95H PAS 和R97E PAS相互作用。后来以全长蛋白做光谱学研究得出的结果如下：（1）硫化氢对6个突变体及野生型的结构均有影响；（2）全长R97A和R97I与硫化氢作用也生成了血红素的修饰物verdoheme；（3）R97E形成了一种新的复合物Fe(II)，这是目前发现的第一个可以分离的没有结合氧气或其他外来配体的复合物；进一步用高效液相色谱法和比色法进行酶活性分析得到的结果显示：（4）实验条件下加入硫化氢之后，野生型和M95突变体的酶活性均增加，而R97突变体的酶活性均没有显著性变化。以上结果证实了M95和R97两个突变位点在硫化氢与EcDOS相互作用中的重要作用，有氧条件下，在硫化氢与全长 EcDOS作用过程中，Fe(III)-SH heme和 Fe(II)-O2复合物对酶活性的增加起主要作用。