PKA/DOC1R通路对小鼠卵母细胞早期发育调节机制的研究

蛋白激酶A（PKA）是信号转导通路的重要调节因子，对维持哺乳动物卵母细胞纺锤体的正常形态和功能至关重要，但PKA在减数分裂纺锤体上的作用底物及作用机制还不清楚。在前期实验中，我们利用Scansite软件分析发现DOC1R-Thr92是PKA的候选靶位点，并在自发成熟的小鼠卵母细胞内检测到磷酸化的DOC1R-Thr92。本项目拟进一步利用体外激酶磷酸化反应，观察体外环境下PKA对DOC1R-Thr92的磷酸化作用；利用免疫共沉淀和酵母双杂交寻找介导PKA磷酸化DOC1R的A型激酶锚定蛋白（AKAPs）及PKA与AKAPs二者相互作用结合的区域；利用间接免疫荧光等方法，观察在小鼠卵母细胞减数分裂过程中，PKA/DOC1R通路的作用，探讨通路发挥作用的机制，以期为哺乳动物卵母细胞发育的机理研究提供直接的实验证据和有价值的理论信息，并为相关疾病如肿瘤增殖、不孕等的机理研究奠定理论基础。