PR1限制性高亲和力T细胞自体治疗慢性粒细胞白血病的实验研究

本项目首先建立HLA-A2+CML患者和正常人PR1限制性CTL克隆细胞系，同时利用HLA-A2转基因鼠，建立相应的鼠克隆细胞系。分析各细胞系的特异性亲和力和其TCR基因序列。进一步采用引入突变策略改变CDR区序列，获得人源性高亲和力TCR基因。然后制备可溶性高亲和力TCR四聚体，反向检测CML细胞表面HLA-A2-PR1表达量，并将高亲和力TCR基因的胞外区与亮氨酸拉链序列及ζ链连接，构建重组慢病毒载体，转染CML患者的T细胞，体外观察CD8+T细胞杀伤毒性及CD4+T细胞活化特性。最后以HLA-A2转基因鼠制备慢性粒细胞白血病模型，用高亲和力PR1限制性鼠TCR基因转染鼠脾脏T细胞，输入CML鼠体内，观察其抗肿瘤效果。获得PR1限制性、高亲和力T细胞，对发展和完善基于TCR基因修饰T细胞的自体肿瘤过继免疫治疗、深入全面改进清除CML微小残余病变的方案均具有十分重要的理论和现实意义。