U-II/UT系统对急性肝衰竭肝组织的炎性损伤效应及对枯否细胞TLR4通路的影响

急性肝衰竭（ALF）的发生与肝组织免疫炎性损伤密切相关。UII/UT受体系统已被证实可促进免疫炎性细胞向损伤部位迁移、聚集，并在ALF肝组织（主要是枯否细胞）中高表达，且其表达增高程度与前炎细胞因子升高水平有密切关系。这提示，UII/UT系统在ALF肝组织炎性损伤机制中发挥着重要作用。本项目在此基础上，通过动物实验，验证了UII/UT系统对ALF肝组织的炎性损伤及对枯否细胞的激活效应；同时，进行了原代枯否细胞（KC）的分离培养。在LPS的刺激下，利用EMSA和PCR芯片等检测方法，探讨UII/UT系统对枯否细胞主要的炎性分泌通路TLR4信号通路分子的作用。我们的研究发现，LPS/D-GalN攻击造成了实验鼠死亡率显著升高，肝内炎症浸润和细胞凋亡显著增加，肝组织UII/UT受体表达明显上调。UT受体拮抗剂urantide的预处理，引起了肝内UII/UT受体表达下调，且避免了肝损伤的发生，并显示急性炎症性肝损伤与UII/UT受体表达之间存在密切的关系。另外，urantide应用防止了LPS/D-GalN攻击鼠前炎细胞因子（包括TNF-α、IL-1β和IFN-γ）的增加，并抑制了NF-κB信号分子通路的活性。我们的研究还发现，在ALF发病过程中，UII的表达和分泌是较TNF-α更加早期的事件。LPS/D-GalN攻击半小时内，UII的表达和分泌即升高并达峰值，而TNF-α直到1 h后才升高并达峰值，IL-1β在6 h后开始升高。在原代KC实验中，我们发现，urantide可抑制LPS刺激诱导的枯否细胞UII/UT和前炎细胞因子TNF-α和IL-1β的表达与分泌。在缺乏LPS刺激的情况下，采用不同剂量UII多肽处理细胞，均诱导了TNF-α表达上调，且高剂量产生的这种诱导或刺激效应更加显著。进一步研究显示，LPS和UII多肽均刺激诱导了KC对TLR4和p-p38 MAPK的表达，并能促进NF-κB p65亚基入核和与DNA分子结合，而这些效应均可被urantide阻断。因此，UII/UT受体系统在ALF肝组织的炎性损伤机制中可能起了关键性的作用。UII有可能作为炎症级联效应的触发者在ALF的发生或启动中发挥重要影响。该项目研究的完成为ALF的免疫炎性损伤机制研究提供了一条新途径或新思路，为ALF疾病的抗炎治疗提供了一个新的药物作用靶点。