内蒙古绒山羊胚胎干细胞系的建立

立足于地区特有的动物资源优势，建立绒山羊胚胎干细胞的分离纯化技术体系和绒山羊胚胎干细胞的抑分化培养体系，从而建立绒山羊胚胎干细胞系。通过酶解法结合机械法，从山羊囊胚期内细胞团分离出干细胞。以无血清培养液为基础培养液，选择不同的细胞因子组合及饲养层细胞以抑制胚胎干细胞的分化，建立胚胎干细胞稳定传代的培养体系。经培养产生纯化的胚胎干细胞克隆，作染色体倍性分析和端粒酶活性或碱性磷酸酶活性分析，以鉴定干细胞。将山羊胚胎干细胞注入绵羊囊胚内，观察其能否形成嵌合胚或将报告基因转入干细胞，再注入山羊囊胚内，追踪干细胞的分化走向，以鉴定干细胞系。本研究拟以山羊胚胎干细胞系的建立为切入点，旨在为后续系列研究干细胞诱导分化模式及其机制，进而研究山羊早期胚胎的分化和发育奠定基础。山羊胚胎干细胞系的建立是大型哺乳动物干细胞诱导分化模式构建的关键步骤，是细胞分化和发育过程及其基因调控机理研究的基础。