Hm2E8-NCTD-liposomes靶向调节HLF/SLUG轴机制的研究

白血病干细胞（leukemic stem cells, LSC）是白血病发生、发展及治疗后复发的重要原因。研究靶向根除LSC的有效治疗方法，则有望治愈白血病，这将对白血病的治疗具有十分的重要的科学意义和临床应用前景。.急性B淋巴细胞白血病存在有免疫表型为CD34+CD19+CD38+/-的白血病干细胞 。正常HSC免疫表型为CD34+CD19-CD38-，可见CD19是B-LSC特异性标记，能将B-LSC和正常的HSC分开，作为靶向B-LSC的一个良好的靶点。HLF在造血干细胞中高表达，为正常造血干细胞命运的调节者。(17，19)染色体易位所形成融合蛋白HLF-E2A使正常造血干细胞或祖细胞向白血病干细胞转化，导致儿童高危前B淋细胞白血病发生和化疗耐药后复发。.免疫脂质体(immunoliposome)是先进的药物传输系统，具有单抗导向和脂质体药物传输的双重特性。已有偶联CD19单抗的免疫脂质体治疗B系白血病的报道，并取得了令人鼓舞结果。但未见偶联CD19单抗的免疫脂质体靶向B-LSC的报道。.斑蝥素（Cantharidin）是干细胞特异性的抗肿瘤药物，能抑制干细胞相关的抗凋亡轴——HLF/SLUG轴，诱导AML-LSC和正常HSC的凋亡。其对正常HSC的杀伤作用在一定程度上削弱了对LSC的治疗优势。去甲斑蝥素（norcantharidin,NCTD）是斑蝥素的衍生物，对B-LSC的杀伤效率和作用机制还不清楚。..2E8是本实验室自行研制鼠抗人CD19的单抗，前期已对2E8进行了一系列的人源化改造（Scfv2E8, HmScFv2E8），保留了其亲本抗体的靶向性。HAL-01细胞高表达HLF-E2A融合蛋白，其中含有恶性转化的B-LSC。本研究以HAL-01细胞作为B-LSC株，制备HmScFv2E8-NCTD-liposome，观察该免疫脂质体对HAL-01细胞靶向识别和杀伤，并研究其对HLF/SLUG轴的作用。具体如下：(1)HmScFv2E8的转染与表达，HmScFv2E8与NCTD-liposome连接，流式细胞术证明两者连接成功,激光粒度测定仪检测其粒径；(2)流式细胞术检测HmScFv2E8-NCTD-liposome对HAL-01细胞的 靶向识别效率；激光共聚焦显微镜观察HmScFv2E8-NCTD-liposome对HAL-01和Molt-3细胞的靶