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SDF-1/HOXB4融合蛋白介导间充质干细胞重建造血微环境及对脐血CD34+细胞定向募集的实验研究
结题报告
批准号:
30970868
项目类别:
面上项目
资助金额:
32.0 万元
负责人:
张勇
学科分类:
H29.放射医学
结题年份:
2012
批准年份:
2009
项目状态:
已结题
项目参与者:
邹仲敏、王劲、钟大平、裴莉、符刚、徐双年
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中文摘要
骨髓间充质干细胞(MSCs)是造血微环境(niche)的重要组分,对造血干细胞(HSCs)保持"干性"和归巢具有支持和趋化作用,合理利用二者关系促进骨髓重建是目前研究的热点和难点。本项目在前期基础上,拟以辐射致伤小鼠为模型,利用MSCs 和HSCs相互关系,将SDF-1/CXCR4生物轴和HOXB4基因对HSCs发育调控有机地结合起来,探讨建立一种新策略,即充分利用SDF-1与CXCR4的相互作用,将SDF-1基因与HOXB4基因构建融合分子,克隆到腺病毒表达载体中转染MSCs,采用核磁共振成像、定量PCR等方法监测移植及重建niche过程。借助HSCs的CXCR4高表达,在重建niche的局部趋化下,增强脐血CD34+细胞的定向募集,并通过HOXB4增强HSCs的增殖能力,最终达到有效重建造血目的。本项目的顺利进行,对丰富干细胞应用的理论知识,以及提高骨髓移植治疗效果均大有裨益。
英文摘要
构建SDF-1、HOXB4和 SDF-1/HOXB4融合基因腺病毒表达载体,转染体外培养的间充质干细胞(mesenchymal stem cells ,MSCs),比较其对CD34+细胞体外扩增及干性维持的影响。全基因合成SDF1/HOXB4基因序列,以其为模板,经PCR、酶切及测序鉴定,构建表达SDF-1、HOXB4和 SDF-1/HOXB4的3种腺病毒载体,转染至293A细胞进行包装和病毒滴度测定。并转染体外培养的MSCs,分别为SDF-1组、HOXB4组和S-H组,转染空腺病毒载体的为阴性对照,转录水平及蛋白水平检测MSCs中外源基因表达。4组MSCs和CD34+细胞共培养7d,计数细胞并检测其CD34表达。测序表明3种腺病毒载体构建成功,在293A细胞中成功包装并获取病毒,RT-PCR和Western blot检测3个基因在MSCs细胞中稳定高表达,MSCs和CD34+细胞共培养,扩增细胞数目SDF-1组(9.52 ±2.24)、S-H组(8.11±2.34)显著高于对照组(4.85 ±2.53)(P<0.05),S-H组(CD34+表达为1.85%)较SDF-1组(1.20%)、HOXB4组(1.28%)更利于CD34+细胞干性维持。S-H组对CD34+细胞体外扩增及干性维持作用更好。
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DOI:--
发表时间:--
期刊:第三军医大学学报
影响因子:--
作者:张勇
通讯作者:张勇
FL及IL-3转染脐血CD34+细胞重建辐射后SCID小鼠造血与免疫
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