顶膜抗原1（AMA1）在犬新孢子虫侵入、发育中的功能研究

犬新孢子虫（Neospora caninum）是顶复合器类寄生原虫，危害牛、犬等动物。顶复合器类原虫入侵细胞过程复杂，有多个蛋白共同参与。顶膜抗原1（Apical Membrane Antigen1,AMA1）是一种微线蛋白，为顶复器亚门原虫所特有且高度保守，是虫体入侵宿主细胞的重要蛋白之一。本项目利用同源重组技术,克隆新孢子虫AMA1 5′和3′ UTR序列，构建用于转染N. caninum的带HXGPRT筛选标记的载体，转染新孢子虫标准株Nc-1达到敲除AMA1基因的目的,构建顶膜抗原1缺陷型的新孢子虫株（ΔNc），通过比较△Nc和Nc-1在培养细胞中对宿主细胞黏附、入侵、发育、繁殖的检测以及在小鼠体内的比较研究，探索NcAMA1的功能；应用免疫共沉淀、免疫印迹、蛋白电泳技术研究NcAMA1与其它功能蛋白的相互作用和影响。为新孢子虫等重要原虫基因和蛋白功能研究及功能抗原的筛选奠定基础。