糖生物学I—糖酰胺酶的研究与应用

糖蛋白及其表面的Ｎ－寡糖是一类十分重要的糖生物大分子，在医药、免疫诊断和营养中有着广阔的应用前景。大量合成糖肽和制备Ｎ－寡糖将极大地推动糖生物学和糖基化工程的研究和发展。目前，合成带有天然糖蛋白完整糖链的糖肽和复杂生物低聚糖Ｎ－寡糖十分困难。本项目研究从自然资源中廉价的糖蛋白大量制备N-寡糖及利用Ｎ－寡糖酶催化合成糖肽的技术方法。项目利用已构建的细菌来源的糖酰胺酶PNGase-F的酵母表面表达细胞固定化酶，建立大量制备N-寡糖的水解反应体系，水解释放糖肽的N-寡糖，并建立N-寡糖的分离、纯化和检测系统。同时采用PCR技术克隆酵母来源的糖酰胺酶PNG1基因，建立啤酒酵母EBY100的表面表达体系及大肠杆菌的高效表达体系，进而利用PNG1水解反应的逆反应即糖苷键合成反应以寡糖和多肽为原料合成糖肽。项目的完成，将为寡糖制备和糖肽合成开拓一条新的途径，该项技术属国内外首创。