一种新B19-VP1u蛋白免疫致心脏病变的分子机制

目的 探讨B19-VP1u蛋白对离体和注射免疫小鼠心肌细胞结构的影响，揭示B19-VP1u 蛋白致心肌病变的机制。.方法 纯化B19 XA1-VP1u 蛋白（B19 -VP1u）和B19 XA1-VP1u 蛋白单克隆抗体（VP1u-mAb），并与离体心肌细胞混合培养，或者注射免疫小鼠（包括孕鼠），再检测心肌细胞和心脏的结构、凋亡基因、细胞因子(IL-1、IL-6、TNF-α和TGF-β1)、粘附分子ICAM-1、VCAM-1水平和NF-κB、PKC-α、p38 MAPK 等细胞表面标志物。.结果①获得高度纯化B19 -VP1u和VP1u-mAb，成功建立了离体Balb/c 小鼠心肌细胞培养方法和小鼠心肌炎模型。②检测各组离体心肌细胞培养液和心肌细胞匀浆中B19-VP1u蛋白量和心肌酶谱结果,提示B19 -VP1u没有进入心肌细胞内，也没有直接损伤心肌细胞膜。③首次发现B19 -VP1u和VP1u-mAb可引起心肌细胞自噬，VP1u-mAb使心肌细胞自噬作用大于B19-VP1u，两者能共同加强心肌细胞自噬。④首次发现B19-VP1u和VP1u-mAb 均可诱导心肌细胞凋亡，而PKC/p38 MAPK信号通路和NF-κB信号通路参与了相关过程。在离体心肌细胞实验和整体动物研究，有类似的结果。⑤首次揭示免疫介导的心肌炎症损伤在B19-VP1u致心肌病变中起重要作用。通过整体动物实验研究检测B19-VP1u和/或VP1u-mAb干预各组小鼠血清中心肌酶谱、炎症细胞因子及细胞粘附分子，发现B19-VP1u干预组和VP1u-mAb干预组小鼠血清中心肌酶、IL-1、IL-6、TNF-α和TGF-β1较对照组明显升高，ICAM-1、VCAM-1和E-selectin在心肌细胞表达增强。⑥首次揭示B19-VP1u与胎鼠流产、心脏发育畸形无关，但可导致胎鼠心脏水肿，心肌细胞凋亡和炎症细胞因子、粘附分子生成增加。⑦获得国家发明专利2 项，发表论文5 篇，培养研究生2人。.结论 B19-VP1u能引起心肌细胞自噬,细胞凋亡,炎症细胞因子和粘附分子的增加。其致心肌病变的机制主要与B19-VP1u和抗体引起的免疫介导的炎症损伤有关;PKC/p38 MAPK信号通路和NF-κB信号通路都参与了相关过程。需要深入研究其相关的生物信号通路的主要激活靶点。