β-葡聚糖受体Dectin-1及其Raf-1信号通路诱导抗肿瘤免疫应答机制的研究

探讨β-葡聚糖（Curdlan）诱导人急性单核细胞白血病细胞系（THP-1细胞系）细胞产生炎症因子的机制。实时荧光定量PCR分析TNF-α、IL-6的mRNA表达水平。酶联免疫吸附法检测培养上清液中细胞因子分泌量。免疫印迹法分析NF-κB抑制蛋白（IκBα）和磷酸化IκBα、p38MAPK、ERK1/2磷酸化水平。共聚焦显微镜检测NF-κBp65细胞核内转位。流式细胞检测细胞膜上Dectin-1表达。结果表明β-葡聚糖刺激THP-1细胞后，TNF-α、IL-6 mRNA水平升高呈现时间依赖效应；β-葡聚糖上调TNF-α、IL-6 mRNA水平为剂量依赖效应。β-葡聚糖刺激THP-1细胞后24h，TNF-α、IL-6蛋白水平显著升高，呈剂量依赖效应。β-葡聚糖作用THP-1细胞后60、120min，IκBα磷酸化水平上升显著升高，而IκBα蛋白水平相应降低；磷酸化p38MARK、ERK1/2显著升高；细胞核内转位的NF-κBp65的水平明显升高。NF-κB、MAPKs抑制剂地塞米松处理THP-1细胞再予β-葡聚糖刺激，其TNF-α、IL-6 mRNA水平明显低于β-葡聚糖单独刺激组。Curdlan上调细胞膜上Dectin-1表达量，呈效应-时间依赖方式。研究结果提示β-葡聚糖诱导THP-1细胞产生炎症因子是依赖Dectin-1及下游信号通路NF-κB、MAPKs。.本研究探讨香菇多糖（LNT）对人THP-1细胞产生IL-12的影响，发现LNT能上调IL-12p35和p40两个亚基的mRNA表达，并呈时间-效应方式；LNT显著促进IL-12的分泌，呈现剂量依赖方式。.我们发现白念珠菌细胞壁不溶性β-葡聚糖（CaIG）可通过与人角质形成细胞（KC）表达的识别受体Dectin-1结合后，在mRNA 水平和蛋白水平上调IL-1β、IL-6的表达和分泌，并呈现时间依赖效应和剂量依赖效应。CaIG激活的KC细胞可通过分泌的IL-1β、 IL-6诱导CCR6+ T cells产生IL-17。.探讨人中性粒细胞能否通过C型凝集素1（Dectin-1）识别CaIG来介导体外杀伤白念珠菌的活性。结果表明β葡聚糖刺激中性粒细胞后明显上调H2O2浓度，呈时间依赖效应。CaIG能上调中性粒细胞杀伤活性。提示Dectin-1参与人中性粒细胞分泌H2O2以及对白念珠菌杀灭活性。