富含Galectin基因修饰的MSC脱细胞真皮基质补片移植治疗大鼠肛门外括约肌损伤

目的 探讨富含Galectin基因修饰的骨髓间充质干细胞(MSC）的脱细胞真皮基质(ADM)补片移植修复大鼠肛门外括约肌损伤的可行性。方法（1）取Wistar大鼠，分离培养MSC，流式细胞仪检测MSC表面标志鉴定MSC；（2）构建重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-Galectin-1；（3）pAdxsi-GFP-Galectin-1转染大鼠骨髓MSC后，通过ELISA以及Western blot检测Galectin-1及Desmin表达；（4）pAdxsi-GFP-Galectin-1转染的大鼠MSC与人ADM补片体外共培养研究：MTT法观察MSC在ADM材料中的生长情况；（5）取Wistar大鼠40只，分成A、B、C、D四组，制成肛门括约肌损伤模型。2周后，将富含Galectin基因修饰的MSC的ADM补片移植于大鼠肛门外括约肌损伤处。A组行端端缝合修补，B组端端缝合加修补处覆盖ADM补片，C组端端缝合加修补处覆盖富含MSC的ADM补片，D组端端缝合加修补处覆盖富含Galectin基因修饰的MSC的ADM补片。6周后移除包括肛管及下端直肠在内的环形标本，行HE和Masson染色观察组织形态学改变，直肠肛管测压评估肛门括约肌功能。 结果（1）大鼠MSC培养及表面抗原鉴定：CD90呈阳性表达，阳性率为98.1%，CD45表达率为3.2%；（2）通过酶切鉴定和基因测序证实重组腺病毒载体pAdxsi-GFP-Galectin-1 构建成功；（3）质粒转染大鼠骨髓MSC 后72小时荧光显微镜下绿色荧光达峰值，细胞培养上清中Galectin-1的分泌量显著高于腺病毒空载体转染MSC组，Desmin的蛋白表达升高；（4）体外共培养结果显示： pAdxsi-GFP-Galectin-1质粒转染MSC在前四天增殖旺盛，共聚焦荧光显微镜下观察MSC与ADM融合生长良好，第四天达高峰，后趋于平稳，证明人ADM材料是MSC的良好载体；（5）HE和Masson染色结果显示：与A、B、C 组相比， D组大鼠损伤肛门括约肌修复处胶原纤维沉积显著减少，血管新生增加及肌纤维增多；肛门外括约肌收缩压力检测，D组显著高于其它各组。 结论 ADM补片是MSC移植的良好载体；Galectin-1能诱导MSC向肌肉分化；富含Galectin-1基因修饰MSC的ADM补片对大鼠损伤EAS具有良好的修复作用。