移植静脉重塑中PCNA及其配体蛋白的蛋白组学研究

冠脉搭桥术后移植静脉桥易发生再狭窄，在很大程度上影响病人的远期疗效。研究的内容主要包括以下三方面：（1）兔移植静脉重塑中凋亡及增殖的时间特性：通过建立兔颈外静脉至同侧颈总动脉的动物模型， HE染色发现，内膜厚度术后1d组较正常静脉组(1.52±0.3µm vs 4.58±0.8µm)比较显著下降(p<0.05)，自术后3d(4.57±0.7)µm组以后各组呈持续性升高趋势。TUNEL法检测细胞凋亡显示，术后1d细胞凋亡达高峰期，较对照组而言凋亡水平显著上升(18.61%±1.5% vs 1.36%±0.2% , p<0.05)然后缓慢下降，至术后7d(1.98%±0.4% vs 1.36%±0.2% , p<0.05)凋亡呈低水平。Western-blotting中显示术后1d PCNA条带灰度百分比低于正常对照组，术后7d PCNA条带灰度百分比达峰值，显著高于正常对照组，之后平缓下降。（2）移植静脉桥关键时间点转录组学研究：选择术后1d，术后7d的移植静脉与正常静脉进行兔4x44K 基因表达谱芯片检测显示，术后第1d、第7d，上调表达差异基因的显著性GO分别为1259、1344个；下调表达差异基因的显著性GO分别为1235、1158个。（3）14-3-3蛋白在移植静脉桥中的表达研究：选择移植术后第1d和第7d移植静脉和对照组的正常静脉，通过PCNA抗体免疫沉淀，用质谱Label-free定量分析技术对PCNA这些配体蛋白进行差异性分析，发现术后1d与术后7d差异蛋白数目分别为30和37个。术后第1d和第7d差异表达蛋白质GO及其富集分析显示GO在BP分类中富集的前15个注释中，氮代谢合成，细胞刺激反应富集度较高。KEGG通路注释中显示PI3K-Akt信号通路、Focal adhesion通路较富集，14-3-3γ蛋白与其密切相关。蛋白质聚类分析中显示目标蛋白质YWHAG和ITGA在同一子集中。我们发现14-3-3γ是移植重塑过程中PCNA的配体蛋白，且其在移植后表达增加，尤其是急性损伤期更明显，为进一步深入研究提供方向与理论基础。