增生性玻璃体视网膜病变血清分子标志物的验证

增生性玻璃体视网膜病变（proliferative vitreoretinopathy，PVR）是导致视网膜脱离手术失败的主要原因。PVR发病机理复杂，临床上缺少客观的评价指标。玻璃体的蛋白质异常表达贯穿在整个PVR病程。本课题组通过二维液相色谱联合质谱分析，鉴定出PVR的玻璃体特异蛋白质，筛选出在PVR患者的玻璃体和血清中同步出现、并与PVR严重程度相关的候选分子标志物：激肽原1 和胰岛素样生长因子结合蛋白6（IGFBP-6）。本研究对这2个候选的分子标注物进行了临床血清样本的验证，结果证实这两个蛋白质的血清浓度与PVR的严重程度成正相关，ROC曲线分析显示当激肽原1高于441.75 ng/ml, IGFBP-6高于181.4pg/ml可以预测为严重PVR；当激肽原1高于88.5 pg/ml和IGFBP-6高于98.5pg/ml可以预测为预后较差。我们又对2个蛋白质参与PVR的贡献进行了研究。采用大鼠玻璃体腔内注入RPE细胞悬液4 μL(2.5×108 /ml)和富含血小板的血浆6 μL(2.5×108 /ml)建立大鼠PVR模型，建模成功率为89.3%。Western blot分析显示激肽原1 和IGFBP-6在PVR组中的表达明显高于对照组（P<0.05）。ELISA结果显示，IGFBP-6在PVR大鼠血清、玻璃体、视网膜的平均浓度高于对照组。Real-Time PCR法检测PVR大鼠的视网膜组织中IGFBP-6mRNA的表达量下降，肝脏中表达不增加。IGFBP-6对ARPE-19细胞的体外研究显示，IGF-Ⅱ可以促进ARPE-19细胞增殖，IGFBP-6干预后，可以抑制IGF-Ⅱ可以促进ARPE-19细胞增殖，而对VEGF、PDGF、TGF-β诱导的ARPE-19细胞增殖没有明显的抑制作用。采用细胞划痕实验法检测对细胞迁移的影响，结果显示IGF-Ⅱ可以促进RPE细胞移行，IGFBP-6干预后，可以抑制 IGF-Ⅱ诱导的RPE细胞的迁移。本研究的完成对PVR的分级有一个全新的量化的概念，对PVR的治疗方式选择和预后评价有积极作用，并为临床上PVR的药物干预提供了新的靶点。