Flp/FRT技术敲除疟原虫SAP1和MSP－1基因对宿主免疫效应机制的研究

疟疾感染与发病的本质是疟原虫子孢子侵入肝细胞及裂殖子不断入侵红细胞的裂体增殖过程。疟原虫的多种蛋白介导了此致病过程，如调控肝细胞内子孢子发育的SAP1 蛋白(Sporozoite Asparagine-rich Protein 1，SAP1)；侵入红细胞的关键蛋白¬——红细胞结合样蛋白（Erythrocyte Binding Like protein, EBL）等。为此，本项目首先利用位点特异性重组技术中的Flp/FRT系统定点敲除EBL基因，构建重组疟原虫模型，初步分析基因重组疟原虫免疫小鼠的免疫效应，揭示敲除EBL基因的子孢子作为减毒活疫苗的可行性。其次，分别构建EBL二区基因片段和含有SAP1高峰抗原决定簇的重组DNA疫苗，建立了免疫鼠模型。研究发现，免疫组特异性抗体IgG及其亚类和细胞因子IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的水平都显著高于对照组。疟原虫攻击后，免疫组呈现了延迟的疟原虫血症和延长的生存时间。说明疫苗对致死型约氏疟原虫的感染具有一定的保护作用。此外，未发现疫苗与小鼠基因组发生整合。本研究为新型疟疾疫苗的开发提供了实验依据。