X连锁生长激素缺乏症新的致病基因GPR101功能研究

为进一步明确GPR101是否为生长激素缺乏症的致病基因，课题组对600名身高正常的儿童GPR101 密码子第878碱基C进行测序家系外的验证工作，结果发现6名正常身高儿童C878T发生突变，其变异率达1%，据此，项目组讨论后考虑该位点为SNP点，结合该6位儿童身高均正常，故GPR101基因不是XLGHD的致病基因，为此，我们调整了研究方法，再次寻找家系的致病基因。方法：（1）采用STR、连锁分析及单倍体推断等手段对家系18位成员选取19个STR位点进行X染色体连锁分析，并结合外显子测序数据分析进行家系内、及600名正常身高儿童中进行家系外验证。（2）对家系中的II-3、III-3、III-4号样本进行全外显子测序分析。（3）对家系中的先证者兄弟3人及其父母，利用illumina芯片SNP6.0进行基因分型分析。（4）对该家系先证者三兄弟及其母亲、阿姨2位携带者经由X染色体全基因外显子捕获测序分析。结果：（1）STR、连锁分析发现候选致病基因位于Xp22.1-Xp11之间，这也进一步肯定了GPR101基因（Xq26.3）不是该家系致病基因。结合外显子测序数据分析发现Xp22.1-Xp11间可能的有23个候选基因共27个SNPs，经家系成员验证发现EGFL6，FTHL17符合X染色体隐性遗传模式，但经600名正常身高儿童中验证发现具有EGFL6和FTHL17同时突变的有5位儿童，故这2个基因亦可排除致病基因可能。（2）家系中的II-3、III-3、III-4号样本进行全外显子测序分析，结合以前研究，仍未发现致病基因。（3）对家系中的先证者兄弟3人及其父母，利用illumina芯片SNP6.0进行基因分型分析，结果未发现致病候选基因；发现的chr2 53kb碱基拷贝数异常（CNP10303），其为常染色体异常，不符合该家系遗传模式。（4）对该家系先证者三兄弟及其母亲、阿姨2位携带者经由X染色体全基因外显子捕获测序结果显示，在三例阳性患者中发现DOCK11:G546R、TBC1D8B:E1028G纯合突变，经家系成员验证排除致病基因可能。结论：该家系候选致病基因位于Xp22.1-Xp11之间，符合X染色体隐性遗传模式，尚未发现明确的致病基因。该研究在国内外首次发现X染色体Xp22.1-Xp11与家族性生长激素缺乏症的发病有关，为生长激素缺乏症的遗传发病机制做出了一定的补充。