氧化型低密度脂蛋白对大鼠肝窦内皮细胞LOX-1的调控机制研究

近年来，2型糖尿病（T2DM）患者非酒精性脂肪肝（NAFLD）的发病率日益增加。氧化型低密度脂蛋白（oxLDL)具有很强的细胞毒性，是诱发血管病变的重要致病因子。oxLDL的细胞毒性效应与其受体-血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1（LOX-1）的表达和调节有关。肝窦内皮细胞（Liver Sinusoids Endothelial Cells，LSECs）在调节脂质代谢中起着重要作用。LSECs损伤和功能障碍是肝脏微循环障碍的早期事件。LSECs是否存在LOX-1？oxLDL对LSECs的细胞毒作用如何？OxLDL对肝脏微循环及脂肪肝形成的具体机制仍不清楚。本研究旨在探讨oxLDL对LSECs、肝脏微循环及与NAFLD的相关性，从分子、细胞及组织水平揭示ox-LDL在脂质代谢紊乱中的病理生理学意义，进而阐明T2DM脂质异常所致的肝窦微循环障碍与NAFLD的发病机制。.本研究主要分为四部分：第一部分，分离和培养原代人肝窦内皮细胞，观察oxLDL对LSECs活性、凋亡及LOX-1的影响；第二部分，建立oxLDL诱导的LSECs损伤模型，观察细胞活性氧族（ROS）、超氧化物歧化酶（SOD）、p38MAPK、核转录因子（NF-κB）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）、内皮素1（ET-1）、小凹蛋白1（caveolin-1）及窗孔的变化特点，探讨oxLDL对肝窦内皮细胞的损伤作用；第三部分，建立LOX-1基因沉默LSECs模型和LOX-1拮抗LSECs模型，给予oxLDL干预，观察ROS、p38MAPK、NF-κB、eNOS、ET-1、caveolin-1及窗孔的变化特点，探讨LOX-1在oxLDL诱导的LSECs功能障碍中的作用及机制；第四部分，建立糖尿病合并脂肪肝大鼠模型，观察肝组织相关指标LOX-1、eNOS、ET-1、caveolin-1及窗孔变化特点。.我们的研究结果表明OxLDL上调LSECs LOX-1表达，诱导LSECs发生凋亡、抑制LSECs活力，诱导LSECs发生氧化应激反应，激活p38MAPK和p65，上调LOX-1、ET-1和caveolin-1的表达，引起细胞炎症损伤和去窗孔化变化；LOX-1介导了oxLDL对LSECs损伤和功能障碍。oxLDL诱导LSECs LOX-1上调所致的肝窦内皮细胞损伤和肝窦微循环障碍是2型糖尿病合并NAFLD发生的重要机制。