以链乳菌为载体的艰难梭菌活菌口服疫苗的应用基础研究

采用食品级乳酸链球菌（乳链菌）作为载体，表达艰难梭菌A毒素C末端重复序列（14CDTA）抗原作为活菌口服疫苗。研究中采用基因拼装的方法，以乳酪链球菌启动子p59和乳链菌分泌型蛋白Usp45的RBS、信号肽和终止子为基本骨架，建立乳链菌的载体表达系统，在乳链菌中表达分泌型14CDTA作为口服活菌疫苗；探索酿脓链球菌M6蛋白的膜锚定序列（CWAM6）与14CDTA联合应用的免疫效果；明确无毒性破伤风毒素C片（TETC）作为艰难梭菌疫苗的生物佐剂作用；观察重组乳链菌作为活菌疫苗在小鼠受艰难梭菌攻击时保护效果，观察小鼠的病死率和肠道的组织学改变，乳链菌和艰难梭菌在肠道的定植情况，血清或/和肠道粘膜IgA、IgG、IgM抗体滴度和特异性抗14CDTA、TETC抗体滴度的变化，肠道粘膜炎性因子水平的变化；明确重组乳链菌对艰难梭菌攻击的保护作用，最终为得到一种能预防艰难梭菌感染的口服活菌疫苗奠定基础。