CNTNAP2与电压门控钾通道相互作用在肝卵圆细胞活化及肝纤维化中的研究
批准号：
81000174
项目类别：
青年科学基金项目
资助金额：
21.0 万元
负责人：
王华枫
依托单位：
学科分类：
肝损伤、修复与再生
结题年份：
2013
批准年份：
2010
项目状态：
已结题
项目参与者：
肖家诚、邓欢、谢静、张本炎、陈俊佶、许海敏
项目摘要
结项摘要
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中文摘要
我们前期研究发现，卵圆细胞活化与肝纤维化密切相关，人乙肝相关肝硬化组织中的卵圆细胞存在CNTNAP2基因。文献报道CNTNAP2与钾通道Kv1．1、Kv1.2相互作用,调控电压门控钾电流，但CNTNAP2在肝脏疾病中的作用未见报道。本研究建立小鼠CDE卵圆细胞模型，研究CNTNAP2、Kv1．1及Kv1.2的表达与肝纤维化的相关性，在卵圆细胞活化不同时期检测CNTNAP2 、Kv1．1与Kv1.2及电压门控钾电流的变化；利用CNTNAP2干扰慢病毒载体及钾通道抑制剂，体内外实验研究CNTNAP2与钾通道相互作用对卵圆细胞活化及肝纤维化的影响；观察CNTNAP2敲除的卵圆细胞移植对急慢性肝损伤模型肝再生及肝纤维化的影响。本项目旨在阐明CNTNAP2及相关钾通道调控卵圆细胞的可能性及机制，探讨其是否及如何通过卵圆细胞影响肝纤维化进程，为卵圆细胞调控的分子机制研究及肝纤维化干预治疗奠定理论依据。
英文摘要
在多种肝脏疾病，当残存的肝细胞增生受到抑制时，肝组织内出现卵圆细胞活化。动物及人类的研究中发现卵圆细胞增殖常伴随基质重建及纤维化过程。CNTNAP2为neurexin家族成员之一，与电压门控钾通道在郎飞氏结旁区共定位，并发现其在13.5周胎龄小鼠胎肝细胞上表达。CNTNAP2及电压门控钾通道（Kv）在卵圆细胞增殖及肝纤维化中作用尚不明确，本项目利用小鼠胆碱缺乏-乙硫氨酸(choline deficient ethionine containing, CDE)卵圆细胞模型检测CNTNAP2及Kv家族Kv1.1,Kv1.2,Kv2.1,Kv1.3,Kv1.5 与Kv1.6的mRNA表达，结果发现CNTNAP2与Kv1.3表达在CDE小鼠肝脏中表达增高；体外分离培养卵圆细胞，验证CNTNAP2及Kv1.3的阳性表达。成功构建CNTNAP2 shRNA慢病毒载体lenti－shCNTNAP2，转染体外培养卵圆细胞，MTT结果显示干扰CNTNAP2表达后卵圆细胞增殖受到抑制。卵圆细胞静息状态下未检测到钾电流，非特异性钾通道阻断剂4-氨基吡啶对卵圆细胞活性改变不明显。经尾静脉注射体内转染lenti－shCNTNAP2同时给予CDE饮食21d，肝脏CNTNAP2及CK19蛋白表达减弱，a-SMA 与I型胶原相对表达量无明显差异。免疫组织化学染色显示转染lenti－shCNTNAP2肝组织内CK19阳性卵圆细胞的个数减少，体内外实验表明CNTNAP2参与调控卵圆细胞增殖过程，但对肝纤维化影响不大，为卵圆细胞活化的分子机制研究提供了新的靶点。
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