携带双自杀基因的可回复永生化肝细胞株优化及应用
结题报告
批准号:
81100309
项目类别:
青年科学基金项目
资助金额:
23.0 万元
负责人:
毕杨
依托单位:
学科分类:
H0311.肝保护和人工肝
结题年份:
2014
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
李英存、石宇、刘瑜、何昀、张小建、陈柏林、文巍
国基评审专家1V1指导 中标率高出同行96.8%
结合最新热点,提供专业选题建议
深度指导申报书撰写,确保创新可行
指导项目中标800+,快速提高中标率
客服二维码
微信扫码咨询
中文摘要
生物人工肝是肝脏功能替代治疗的一种重要技术方法,细胞的稳定来源及安全性是急需解决的关键问题。已知SV40T能促进原代肝细胞体外永生化增殖,可获得足够数量的细胞,但其长期存在于细胞并导入体内可能导致恶性转化。近年来,围绕如何降低SV40T永生化肝细胞应用于人体的危险性开展了大量研究。鉴于现有可回复永生化方法的缺陷,我们优化设计了一种携带双自杀基因(胞嘧啶脱氨酶CD及单纯疱疹病毒胸苷激酶HSV-tk)的可诱导敲除系统,创造性地将Cre-LoxP 位点重组技术用于双自杀基因的可控性表达,通过逆转录病毒系统一次性导入SV40T、CD及HSV-tk基因,构建一种新型的可回复永生化肝细胞株。该细胞株既能在体外不断增殖又能保证肝细胞的表型和正常功能,在体内应用前将可疑致癌和抑制肝细胞功能的永生化基因敲除,并且进入体内的外源细胞也能在药物作用下自杀,有望为生物人工肝技术提供一种稳定、安全的理想肝细胞来源。
英文摘要
中文摘要(对项目的完成情况及取得成果做简单概述,1000字以内):.本项目将Cre-LoxP定点敲除系统运用于双自杀基因的可控性表达,获得一种可回复永生化人肝细胞株,保证获得足够来源的细胞,并具有良好的生物安全性,解决目前生物人工肝技术中细胞来源缺乏及体内应用的安全性问题。具体研究结果如下:1. 比较了成体肝细胞与胚胎肝干细胞的体外分离培养及增殖和成熟分化的生物学特性:胚胎来源的HP14.5d肝祖细胞较成体肝细胞LC3m增殖能力强,能够高表达肝干细胞的标志,低表达或不表达特异性的成熟肝细胞标志,属于低分化阶段的肝实质细胞, 2%HS+0.1μmol/L Dex+10ng/mlHGF+20ng/mlFGF4诱导后可向成熟肝细胞分化,ICG摄取和糖原合成功能显著增强,更适用于肝细胞移植的种子细胞。2. 采用两步法成功构建了携带双自杀基因的可回复永生化肝细胞株,该细胞株能分别表达SV40T永生化基因和CD、HSV-tk双自杀基因,并在Cre-Loxp位点特异性重组下实现HSV-tk的可控性表达,细胞在裸鼠皮下不成瘤,生物安全性好,并在5-FC前体药物的作用下选择性自杀。3. 建立了不同CCL4浓度诱导的急性肝衰竭小鼠模型,其中2%CCl4的诱导模型肝脏损伤适度,自身修复能力有限,可反应肝细胞移植治疗的效果。肝细胞移植可提高模型小鼠存活率,恢复肝脏指数,显著改善AST和ALT水平,逆转肝脏的病理改变,对肝损伤具有较强的修复作用。
期刊论文列表
专著列表
科研奖励列表
会议论文列表
专利列表
DOI:--
发表时间:2013
期刊:Braz J Med Biol Res.
影响因子:--
作者:Bi, Yang;He, Yun;Huang, Jiayi;Xu, Lei;Tang, Ni;He, Tongchuan;Feng, Tao;
通讯作者:
DOI:--
发表时间:2014
期刊:基础医学与临床
影响因子:--
作者:周建武;何昀;龚梦嘉;毕杨
通讯作者:毕杨
DOI:10.1371/journal.pone.0032428
发表时间:2012
期刊:PloS one
影响因子:3.7
作者:Huang E;Bi Y;Jiang W;Luo X;Yang K;Gao JL;Gao Y;Luo Q;Shi Q;Kim SH;Liu X;Li M;Hu N;Liu H;Cui J;Zhang W;Li R;Chen X;Shen J;Kong Y;Zhang J;Wang J;Luo J;He BC;Wang H;Reid RR;Luu HH;Haydon RC;Yang L;He TC
通讯作者:He TC
DOI:--
发表时间:--
期刊:Molecular Medicine Reports
影响因子:3.4
作者:He, Yun;Cui, Jiejie;He, Tongchuan;Bi, Yang
通讯作者:Bi, Yang
DOI:--
发表时间:2013
期刊:Braz J Med Biol Res.
影响因子:--
作者:Bi, Yang;He, Yun;Huang, Jiayi;Xu, Lei;Tang, Ni;He, Tongchuan;Feng, Tao
通讯作者:Feng, Tao
低氧通过Nrf2诱导铁死亡抵抗对尿源干细胞移植治疗慢性肝纤维化的作用及机制研究
  • 批准号:
    --
  • 项目类别:
    省市级项目
  • 资助金额:
    0.0万元
  • 批准年份:
    2025
  • 负责人:
    毕杨
  • 依托单位:
ATRA抑制肝星状细胞活化对慢性肝纤维化的作用及机制研究
  • 批准号:
    --
  • 项目类别:
    省市级项目
  • 资助金额:
    0.0万元
  • 批准年份:
    2021
  • 负责人:
    毕杨
  • 依托单位:
国内基金
海外基金