压力负荷诱导趋化因子RANTES在骨关节炎软骨细胞表达的调控分子机制研究

骨关节炎（OA）是一种常见的慢性关节炎,大量研究OA的发生与趋化因子RANTES有关，本研究拟在寻找调控RANTES的应答元件，并通过突变子载体转染探索相应应答元件在调控软骨细胞表达RANTES中的作用，以期关键调控元件，为在OA开展抑制病变分子的治疗奠定实验室基础。.方法：本研究采用TESS软件，分析RANTES启动子-2K序列的基因应答元件（RE），并构建RANTES启动子的克隆及报告基因载体，利用凝胶迁移实验（EMSA）及染色质免疫沉淀分析（CHIP）报告基因载体进行分析，同时采用靶基因转染表达观察对压力诱导软骨细胞表达RANTES的影响。.结果：（1）利用TESS软件，分析RANTES启动子-2K序列的基因应答元件（RE）结果：我们人基因组数据库资料，利用TESS软件对RANTES启动子-2K序列的基因应答元件（RE）分析（图1），发现RANTES启动子有多个应答元件，包括：AP-1（-961）、IEF-1（-579）、C/EBP（-231）、SP-1(-79)和NFκB(-44，-30)；（2）构建了RANTES启动子的克隆及报告基因载体， EMSA及CHIP）证实hrantes-m5、-m6( NF-kB1，NF-kB2)突变报告载体获阳性结果，表明NF-kB1，NF-kB2介入RANTES的调控。（3）发现RANTES mRNA在早期病变的OA软骨表达最为明显，并随压力的增加而逐渐升高。（4）经多次实验，经转染后大部分细胞死亡，少部分存活细胞不再分裂生长，无法进行功能检测。.结论：RANTES启动子区存在多个应答调控元件，但凝胶迁移实验及染色质免疫沉淀分析仅证实hrantes-m5、-m6( NF-kB1，NF-kB2)突变报告载体获阳性结果，表明NF-kB1，NF-kB2介入RANTES的调控。OA病变软骨部位有RANTES 高表达，培养的OA软骨细胞在施压状态呈现与压力相关的表达增高。研究结果表明RANTES启动子 NF-kB1，NF-kB2介入RANTES的调控,RANTES参与OA的病变过程,且与压力有关,这很好地解释了OA好发于负重关节。抑制通路可望阻断RANTES在OA的过表达,从而可能达到控制病变进展。