新城疫病毒HN蛋白茎区突变体构建及其生物学特性研究

新城疫病毒血凝素神经氨酸酶蛋白(HN)由球状头部和茎区部分组成，球状头部的结构和功能研究较为深入，但茎区氨基酸序列调控病毒生物学特性的分子机制尚未完全清楚，已有研究结果也有待进一步验证和解析。本项目以基因Ⅶ型新城疫病毒G7株作为研究对象，对 HN 茎区HR之间的居间序列进行突变，构建6 个 HN 突变体，对野生型和突变型 HN 蛋白进行细胞表面表达、受体结合、神经氨酸酶和细胞融合等特性的比较分析，验证了居间序列突变对 HN 蛋白生物学功能的影响。进一步，利用反向遗传技术进行病毒拯救，获得5株HN 突变型和野生型新城疫病毒，通过病毒复制动力学分析和SPF 动物实验等技术从不同层面、系统解析居间序列突变对病毒感染性和致病性等生物学特性的影响。结果表明，茎区HR居间序列突变降低了病毒在BHK-21细胞上的增殖活性，同时病毒对SPF鸡有毒力致弱作用，并降低了病毒的感染性。本课题系统研究了HN蛋白居间序列突变对蛋白和病毒生物学特性的影响，为深入研究副黏病毒的膜融合机制拓展了思路，为NDV新型疫苗的研制及靶向小分子药物的开发积累了实验数据，提供了理论依据。