项目的背景：PKA信号通路的活化抑制细胞自噬的发生，但PKA如何抑制自噬，其机制不清楚。本项目旨在解析PKA是否通过磷酸化Beclin1而参与自噬的调控作用。.主要研究内容：.（1）.明确Beclin1的S295位点磷酸化对自噬的影响.（2）.明确Beclin1的PKA介导的S295磷酸化对其在细胞内分布的影响.（3）.明确Beclin1的PKA介导的S295磷酸化对其与PI3KC3相互作用的影响.（4）.明确Beclin1的PKA介导的S295磷酸化对PI3KC3脂质激酶活性的影响.（5）.明确Beclin1的S295磷酸化在PKA信号调控自噬活性中的作用.研究结果：本项目通过双向电泳、质谱分析鉴定出PKA直接磷酸化Beclin1。通过生物信息学分析，S295为PKA潜在磷酸化位点，采用定点诱变和体外磷酸化，确定了PKA在S295位点磷酸化Beclin1。本项目通过构建模拟S295磷酸化（S295D）和阻碍S295磷酸化（S295A）突变型Beclin1表达载体，解析了S295磷酸化对Beclin1的细胞内定位及细胞自噬的影响。本项目发现S295磷酸化状态对Beclin1的细胞内定位无明显影响。S295A Beclin1与PI3KC3的基础结合水平增加，饥饿增加Beclin1与PI2KC3的相互作用，但与是否磷酸化没有关系。我们还发现S295A Beclin1增加基础水平的PI3KC3脂质激酶活性及细胞自噬，但在饥饿诱导的自噬时，S295A Beclin1失去促进作用。另外，我们还发现forskolin抑制野生型Beclin1诱导的自噬，而对S295A Beclin1诱导的自噬无抑制作用。本项目表明PKA可能通过该磷酸化Beclin1而抑制自噬。.科学意义：本项目首次阐明Beclin1是PKA的直接磷酸化底物，PKA通过磷酸化Beclin1抑制PI3KC3的脂质激酶活性及自噬。本项目有助于我们理解PKA抑制自噬的分子机制。