PirB重链VHH抗体的筛选及其治疗脑缺血损伤的研究

封闭或拮抗PirB受体信号通路很可能促进轴突再生、促进脑缺血损伤后神经功能的恢复。我们的研究从两个方面出发来阻断PirB通路：一是，表达了PirB受体的胞外段，从而竞争性地与神经抑制因子结合，达到阻断PirB通路的作用；二是，筛选PirB受体的单域抗体，从而拮抗PirB受体的功能。目前，我们的研究结果有：1）首次揭示了PirB受体在缺血再灌注后表达显著上调，表明PirB参与调控脑缺血损伤，为基于PirB为治疗靶点提出了理论成果；2）而且我们通过可溶原核表达系统，TAT蛋白转导结构域修饰以及LBD结构域修饰的PirB胞外段蛋白，命名为TAT-LBD-PirBex（TLP）；发现TLP可以通过腹腔注射后进入脑实质，并且TLP可以与Nogo66、MAG、Omgp结合，阻止其与神经元上的PirB受体结合；3）研究结果表明，TLP对体外培养的神经元具有保护作用以及促进轴突生长的功能；4）在体研究表明，TLP蛋白对MCAO模型动物具有保护作用，可以促进该模型动物神经功能的恢复；5）初步筛选并获得拮抗PirB受体的VHH抗体。我们的实验表明，分别通过阻断PirB受体本身和阻断配体与受体的结合方法，从而阻断PirB通路，均可以对神经元具有保护作用和促进神经轴突生长的作用；可以促进MCAO动物模型的神经功能的恢复。我们的研究为进一步研究脑保护和神经再生及功能恢复提供了实验依据。