β-防御素2在子宫内膜异位症中的作用及机制

子宫内膜异位症(endometriosis, EMS)是一种常见的妇科良性疾病，有着恶性肿瘤的某些生物学特性。大量临床和基础研究显示，EMS与免疫炎症反应和血管生成有着密切的关系，以VEGF等血管调控因子介导的血管生成是其发展的必要环节。人β防御素2（human βdefensin, hBD-2）是一种内源性抗菌肽，体外和体内实验均提示hBD-2可能具有抗免疫炎症反应及抗血管生成的作用。.本项目的研究内容是：（1）体外培养EMS患者在位内膜细胞和血管内皮细胞，分别给予hBD-2基因转染和基因沉默等处理，然后采用前炎症细胞因子IL-1β、TNFα以及VEGF、NF-kB等进行干预，观察在不同的干预因素下子宫内膜细胞和血管内皮细胞的生物学行为改变。（2）建立大鼠EMS模型，并构建hBD-2的逆转录病毒重组质粒，观察hBD-2基因转染对EMS的影响，从而探讨其对EMS的作用及机制。研究结果如下。 .1、体外培养EMS患者在位内膜细胞和血管内皮细胞，探索了一种能获得较高纯度和较多数量的子宫内膜细胞的分离培养方法——改良筛网法，不仅操作方法简单，而且能获得明显高于传统筛网法的较高纯度的子宫内膜间质细胞和腺上皮细胞（陈淑琴等，现代妇产科杂志，2012）。对体外培养EMS患者在位内膜细胞，发现子宫内膜腺上皮细胞中hBD-2的表达为：子宫内膜间质细胞中hBD-2的表达为：说明子宫内膜腺上皮细胞中才有hBD-2的表达。因此，hBD-2的过表达和基因沉默实验以子宫内膜腺上皮细胞为研究对象。.2、成功构建携带hBD-2基因的逆转录病毒载体的质粒(pLXSN-hBD2)和hBD-2基因沉默的质粒 (pSicence-2.1-U6 neo)，给予pLXSN-hBD2和pSicence-2.1-U6 neo基因转染至子宫内膜细胞并鉴定转染率后，发现hBD-2基因过表达后子宫内膜腺上皮细胞的粘附能力、迁移能力和侵袭能力等生物学行为明显下降；给予hBD-2基因沉默后，发现其的粘附能力、迁移能力和侵袭能力等明显增高。.3、建立自体子宫内膜移植法建立EMS的SD大鼠模型，采用局部多点注射重组质粒pLXSN-hBD2的方法，并进行外源基因转染整合的鉴定，将hBD-2基因成功转染到大鼠模型异位病灶组织中。（金文艳，陈淑琴等，新医学，2012.范莉，陈淑琴等，中华生物医学工程杂志，2013）.4、观察到h