应用SILAC技术研究亨廷顿蛋白在调节自噬中的作用

本项目采用RNA干扰等分子生物学技术和定量蛋白质组学技术研究了内源性亨廷顿蛋白（分子量350kDa）在细胞自噬活动调节中的作用，我们在HEK293细胞、Hela细胞、PC12细胞三种细胞株上发现：（1）内源性亨廷顿蛋白缺失可提高细胞自噬活动的水平，但这种自噬活动是有缺陷的自噬活动；内源性亨廷顿蛋白缺失引起的细胞死亡可能与这种有缺陷的自噬活动有关；2）我们对内源性亨廷顿蛋白缺失细胞中1958个蛋白进行了高通量质谱定量分析，发现其中蛋白表达水平上调的蛋白质有 65 个，蛋白表达水平下调的蛋白质有 79 个；选择了mTOR通路中Caveolin-1进行表型验证实验，发现其参与了内源性亨廷顿蛋白调节自噬活动的过程，这些表达发生变化的蛋白质是我们深入研究内源性亨廷顿蛋白调节自噬活动的分子机制的切入点。上述结果证实内源性亨廷顿蛋白是一个重要的细胞自噬活动调节蛋白，为亨廷顿蛋白的功能赋予了新的内涵，也为研究亨廷顿蛋白缺失引起的相关的病理过程和疾病提供了新的视角和靶点。