汉防己甲素对唑类药物抗白念珠菌活性的增效机制

本项目如期完成了合同书的内容。具体如下。.1. 以real-time RT-PCR分别检测已知唑类药物耐药基因CDR1、CDR2、MDR1、FLU1、ERG11的表达情况，发现汉防己甲素逆转白念珠菌耐药的机制与CDR1、CDR2的关系较MDR1、FLU1、ERG11的关系密切；与减少ATP的供能及降低ADH1的表达密切相关。.2. 以VVC患者白念珠菌临床株20株以及同一亲本来源的白念珠菌2株，应用real-time RT-PCR分别检测ADH1、CDR1、CDR2、MDR1、FLU1及ERG11在mRNA水平的表达情况，结果表明ADH1在mRNA水平的高表达与白念珠菌耐药相关；且ADH1与CDR1、CDR2、FLU1在mRNA水平的表达量呈正相关。.3. 以同一亲本来源的白念珠菌FLC敏感株CA-3和耐药株CA-16为对象，以膜蛋白质组学技术鉴定差异表达的膜蛋白质，结果发现Adh1p与白念珠菌对FLC的耐药有相关性；其相关通路可能与外排泵功能，尤其可能与其供能有关，进而影响细胞的外排功能。.4. 以白念珠菌FLC敏感株CA-3为研究对象，以蛋白质组学技术比较汉防己甲素或（和）FLC处理前后差异表达的蛋白质，结果发现Adh1p参与了汉防己甲素对FLC抗白念珠菌的增效机制。.5. 汉防己甲素在体外对FLC抗白念珠菌生物膜初期（0h）、早期（4h）有增效活性，对中期（24h）、成熟期（48h）无增效活性；对FLC抗白念珠菌生物膜重新悬浮后的低浓度菌液（1×103 CFU/mL）有增效活性，高浓度菌液（1×106 CFU/mL）无增效活性。.6. 通过流式细胞术，发现汉防己甲素能通过增加S期细胞数来减少G2/M期细胞，能抑制细胞分裂，从而逆转耐药。.7. 项目还增加了以棋盘法和时间-杀菌曲线法测定并评价汉防己甲素与唑类药物对白念珠菌的体外联合抗真菌作用、汉防己甲素对益康唑 / 联苯苄唑抗须癣毛癣菌活性增效作用的体内实验、汉防己甲素对KCZ外用治疗皮肤癣菌病增效作用的临床研究、汉防己甲素对FLC外用治疗外阴阴道念珠菌病增效作用的临床研究等内容。. 通过项目研究，在SCI收录期刊发表论著3篇，CSCD核心库期刊6篇；另有3篇英文论著已投稿。获国家发明专利授权1件。从核酸、蛋白质、细胞三个层面，系统性揭示了汉防己甲素对唑类药物抗白念珠菌的增效机制。