花狭口蛙海南亚种皮肤Kph-hemolysin溶血活性及细胞毒活性研究
结题报告
批准号:
30960053
项目类别:
地区科学基金项目
资助金额:
24.0 万元
负责人:
张英霞
依托单位:
学科分类:
C0403.动物生理与行为
结题年份:
2012
批准年份:
2009
项目状态:
已结题
项目参与者:
朱伟、满初日嘎、韦双双、刘富平、陈品林、王轶
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中文摘要
两栖动物皮肤中含有大量分子结构特殊、功能复杂的生物活性物质,并已部分应用于临床,如用于抗菌及烧伤治疗等。花狭口蛙海南亚种(Kaloula pulchra hainana),为海南省特有两栖动物,隶属无尾目,姬蛙科,狭口蛙属,生活于低海拔地区水沟附近,生存环境恶劣,富有大量病原体,受攻击时皮肤分泌大量白色分泌物。目前从该分泌物中获得了具有强烈溶血活性的蛋白,命名为Kph-hemolysin,该蛋白还具有较强的细胞毒活性。本项目将对该蛋白的cDNA序列进行克隆及分析,并对其溶血活性及肿瘤细胞抑制活性的机制进行深入探讨。以研究其在狭口蛙海南亚种皮肤中所承担的生物学功能,以助于揭示两栖类皮肤活性蛋白多肽的生理、毒理和药理活性,及其分子间相互作用的生物逻辑,分子机制等,解释两栖类皮肤活性蛋白多肽的生物学功能和生物环境适应机制,并为其应用于药物研究与开发打下基础。
英文摘要
两栖类动物皮肤中含有大量的分子结构特殊、功能复杂多样的生物活性物质,并已部分应用于临床,如用于抗菌及烧伤治疗等。花狭口蛙海南亚种为海南省特有两栖动物,生活于低海拔地区水沟附近,生存环境恶劣,富有大量病原体。受到刺激时,皮肤分泌白色粘液,少有天敌。已从其皮肤分泌物中获得一特异性的胰蛋白酶抑制剂。利用人,牛,兔,及鸡的红细胞检测,发现其皮肤分泌物具有极强的溶血活性,人红细胞对其最敏感。经阴离子交换层析和凝胶过滤层析等方法分离纯化得到两种溶血素,SDS-PAGE显示,两种蛋白表观分子量为47和22 kDa,分别命名为Kph-hemolysin1和Kph-hemolysin2。用人健康红细胞进行溶血测试,分析不同因素对Kph-hemolysin1溶血活性的影响,如不同分子量PEG(300,400,1000,2000,3400,6000),金属离子(Mg2+, Ca2+, Ba2+, Cu2+, K+),抗氧化剂等。结果显示PEG1000明显抑制其溶血活性。金属离子中Cu2+抑制作用显著,其它金属离子及抗氧化剂几乎无抑制。推断Kph-hemolysin1为孔道蛋白,该孔道蛋白在细胞膜上附着聚集形成孔道引起细胞破裂溶解,孔道直径约1.36-2.4 nm。经MTT实验检测,Kph-hemolysin1能抑制H9及C8166肿瘤细胞的生长,处理48h后,CC50分别为2.31和2.48 uM。经Kph-hemolysin1处理后的H9细胞细胞核发生凝缩,变形。提取处理后的H9细胞DNA,经电泳检测出现DNA片段化。经流式细胞仪分析3 uM Kph-hemolysin1处理48h后的H9细胞,亚二倍体细胞数为29.3%。说明Kph-hemolysin1对细胞的毒性作用是引起细胞发生凋亡。孔道蛋白是研究蛋白质与细胞受体间相互作用的模式分子,因此该研究为生物医学研究,如探讨特定细胞群(如血细胞)、膜受体分子和特定蛋白质分子在生理、病理过程中的功能提供可能的专一性强的分子探针。
期刊论文列表
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DOI:--
发表时间:--
期刊:安徽农业科学
影响因子:--
作者:陈聪伟;迟婷婷;韦双双;关怀;满初日嘎;张英霞;CHEN Cong-wei et al(Key Laboratory of Tropic Biolo
通讯作者:CHEN Cong-wei et al(Key Laboratory of Tropic Biolo
Purification and Characterization of Albumin from Frog Skin of Duttaphrynus melanostictus
Duttaphrynus melanostictus 蛙皮白蛋白的纯化和表征
DOI:10.1007/s10930-011-9349-6
发表时间:2011-08
期刊:PROTEIN JOURNAL
影响因子:3
作者:Zhang, Ying-Xia;Chen, Cong-Wei;Wang, Manchuriga;Wei, Shuang-Shuang;Guan, Huai;Chi, Ting-Ting;Qi, Xing-Zhu;Hu, Wen-Ting
通讯作者:Hu, Wen-Ting
DOI:10.1016/j.toxicon.2010.05.006
发表时间:2010-09
期刊:Toxicon : official journal of the International Society on Toxinology
影响因子:--
作者:Yingxia Zhang;Manchuriga Wang;Shuangshuang Wei
通讯作者:Yingxia Zhang;Manchuriga Wang;Shuangshuang Wei
定向优化的海南沼蛙temporin衍生肽抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物被膜机制及抗感染作用研究
  • 批准号:
    32060130
  • 项目类别:
    地区科学基金项目
  • 资助金额:
    35万元
  • 批准年份:
    2020
  • 负责人:
    张英霞
  • 依托单位:
海南沼蛙皮肤抗菌肽的结构与功能关系及其抗菌机理研究
  • 批准号:
    31560593
  • 项目类别:
    地区科学基金项目
  • 资助金额:
    40.0万元
  • 批准年份:
    2015
  • 负责人:
    张英霞
  • 依托单位:
海南特有花狭口蛙海南亚种皮肤活性蛋白多肽的研究与利用
  • 批准号:
    30700128
  • 项目类别:
    青年科学基金项目
  • 资助金额:
    16.0万元
  • 批准年份:
    2007
  • 负责人:
    张英霞
  • 依托单位:
国内基金
海外基金