色氨酰tRNA合成酶与色氨酸tRNA的光交联研究

近十年来本组在一基金委重点项目和两个面上项目的资助下，在tRNATrp(色氨酸tRNA)和TrpRS(色氨酰tRNA合成酶)的种族特异性研究方面，通过分子生物学、结构生物学等技术，发表了十多篇SCI论文，研究证明TrpRS可作为广谱杀菌剂筛选用的药靶，有潜在的应用前景。近来我们证明人TrpRS上有两个tRNA的结合位点，从而产生两问题：为什么需要两个结合位点？tRNA氨酰化过程中，tRNA与此二位点结合的次序如何？用现有的分子生物学或结构生物学方法无法解决此问题，故本申请希望通过将光化学交联试剂定点导入tRNA或合成酶的特定位点，分别形成tRNA-合成酶复合物、用紫外光交联、蛋白水解酶水解其中的合成酶、核糖核酸酶水解其中的tRNA、产物经质谱分析(确定各产物分子量)，与单纯合成酶和tRNA的酶切、质谱分析结果比较，以确定色氨酸tRNA氨酰化反应的历程，解决前述的科学问题。