TLR2影响角膜移植术后植片转归的机制研究

批准号:
81170887
项目类别:
面上项目
资助金额:
56.0 万元
负责人:
白浪
依托单位:
学科分类:
H1308.眼组织移植
结题年份:
2015
批准年份:
2011
项目状态:
已结题
项目参与者:
吴京、汤明芳、熊柯、谭青、宗建华
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中文摘要
我们通过筛查移植术后角膜植片TLR2/TLR3/TLR4mRNA表达,发现TLR2mRNA在同种异体角膜移植术后第9天特异性升高,且证实与排斥反应的发生时间一致。因而推测TLR2可能与角膜移植术后非特异性免疫炎症向排斥反应转化有关。进一步实验显示移植后手术各组角膜植片存在不同程度的炎症反应,同种异体角膜移植排斥组最为严重,术后7-9天植片上皮细胞的TLR2分子由细胞浆向细胞膜表达增强,同时检测到TLR2下游信号分子MyD88mRNA特异性增高。由此,首次提出TLR2及其信号系统可能参与同种异体角膜移植术后排斥反应的新机制。本课题拟采用TLR2抗体处理移植后大鼠和TLR2基因敲除致免疫缺陷鼠进行角膜移植,观察植片的转归,以证实TLR2是移植术后非特异性炎症向排斥反应转化的关键因子,发掘排斥反应的治疗靶点;进一步运用RNA干扰技术阻断移植后TLR2的信号传递,为基因治疗临床应用提供实验依据。
英文摘要
作为天然免疫的主要模式识别受体,Toll 样受体(TLRs)通过识别病原相关分子模式下传信号,诱导免疫相关基因表达和分泌促炎因子,启动后天免疫系统,并在获得性免疫应答中发挥重要的调节作用。文献报道TLRs可能参与肾、皮肤等器官/组织移植术后免疫反应。我们的前期实验首次提示TLR2可能参与大鼠角膜移植术后排斥反应。本课题旨在进一步证实天然免疫受体TLR2及其信号系统参与异体角膜移植术后的排斥反应,并探索基因治疗的可能性。主要课题内容包括:分别采用TLR2单克隆抗体处理移植后大鼠(实验一)和TLR2基因敲除致免疫缺陷鼠(实验二)进行角膜移植,观察植片的转归,RT-PCR,免疫组化及流式细胞分析TLR2及下游信号MyD88 的mRNA和蛋白的表达,以证实TLR2是移植术后非特异性炎症向排斥反应转化的关键因子,进一步运用慢病毒载体介导RNA干扰技术阻断移植术后TLR2的信号传递(实验三),评估植片的存活情况及siRNA的治疗效果,发掘排斥反应的可能治疗靶点。实验内容已经按计划完成,结果显示: TLR2单克隆抗体和慢病毒介导TLR2siRNA有效减少大鼠角膜植片TLR2及其下游信号MyD88的mRNA和蛋白表达,角膜植片炎症反应程度减轻,植片存活时间延长,证实了TLR2/MyD88信号系统参与了免疫排斥反应。TLR2基因敲除后小鼠角膜植片TLR2及其下游信号MyD88的mRNA和蛋白表达显著减少,角膜植片炎症反应程度轻,植片存活时间延长,证实了TLR2/MyD88信号系统参与了小鼠角膜移植后的免疫排斥反应。本课题首次应用TLR2单克隆抗体和慢病毒介导TLR2siRNA干扰技术抑制大鼠角膜移植术后排斥反应,首次应用TLR2基因敲除小鼠进行角膜移植排斥反应的研究,证实了天然免疫受体TLR2参与啮齿类动物角膜移植术后早期免疫反应的机制,为临床基因治疗提供了实验依据。
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Blockade of Toll-like Receptor 2 Expression and Membrane Translocation in Rat Corneal Epithelial Cells by Glucocorticoid (TobraDex) After Penetrating Keratoplasty
穿透性角膜移植术后糖皮质激素 (TobraDex) 阻断大鼠角膜上皮细胞中 Toll 样受体 2 的表达和膜易位
DOI:10.1097/ico.0b013e318213f389
发表时间:2011-11
期刊:Cornea
影响因子:2.8
作者:Zhong, Yan-Yan;Yu, Jian;Tang, Ming-Fang;Zhang, Jing
通讯作者:Zhang, Jing
Blockade of Toll-like Receptor 2 Expression and Membrane Translocation in Rat Corneal Epithelial Cells by Glucocorticoid (TobraDex) After Penetrating Keratoplasty (vol 30, pg 1253, 2011)
穿透性角膜移植术后糖皮质激素 (TobraDex) 阻断大鼠角膜上皮细胞中 Toll 样受体 2 的表达和膜易位(第 30 卷,第 1253 页,2011 年)
DOI:--
发表时间:2012
期刊:Cornea
影响因子:2.8
作者:Bai, Lang
通讯作者:Bai, Lang
DOI:--
发表时间:2014
期刊:中国免疫学杂志
影响因子:--
作者:郑艳华;白浪
通讯作者:白浪
DOI:--
发表时间:2015
期刊:眼科新进展
影响因子:--
作者:梁伟怡;于健;杨娟;谭青
通讯作者:谭青
DOI:--
发表时间:2015
期刊:眼科新进展
影响因子:--
作者:苏亚茹;于健;刘琼;杨娟
通讯作者:杨娟
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