FA/BRCA途径中siRNA干扰和PARP-1抑制剂对多药耐药骨髓瘤细胞株的影响
批准号：
81001053
项目类别：
青年科学基金项目
资助金额：
20.0 万元
负责人：
肖晖
依托单位：
学科分类：
肿瘤学
结题年份：
2013
批准年份：
2010
项目状态：
已结题
项目参与者：
陈飞、何莉、周怡、刘明辉、谢骁茜、胡宁
项目摘要
结项摘要
项目成果
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中文摘要
FA/BRCA途径在修复化学药物所致的DNA链间交联损伤(ICLs)过程中起重要作用，烷化剂(即DNA交联剂)可通过该途径来发挥肿瘤杀伤作用，其继发耐药可能与该途径的活性增强有关。链间交联损伤修复机制中的一个重要蛋白是多聚(ADP-核糖)聚合酶1(PARP-1)，抑制 PARP-1能延缓对ICL的修复。我们前期研究表明，骨髓瘤多药耐药细胞株耐药性的产生可能与FA/BRCA途径中的FANCD2表达增强有关。我们推测：运用siRNA干扰或PARP-1抑制剂可抑制FA/BRCA相关蛋白表达，致DNA损伤修复减弱，耐药瘤细胞对烷化剂敏感性增强。因此，本研究目的：1) 用siRNA干扰抑制FA/BRCA途径FANCD2蛋白表达，观察耐药细胞株对烷化剂药物敏感性的变化；2) PARP-1抑制剂PJ34作用耐药瘤细胞株，探讨PJ34对DNA损伤修复和耐药性的影响及与FA/BRCA途径可能存在的关系。
英文摘要
目的：探讨FA/BRCA (Fanconi anemia/BRCA)中SiRNA干扰对多药耐药骨髓瘤细胞株RPMI8226/R的影响；研究PARP-1抑制剂PJ-34对RPMI8226/R的作用，进一步探讨PJ-34对DNA损伤修复和耐药性的影响及与FA/BRCA途径的可能联系。方法：用siRNA干扰抑制FA/BRCA途径FANCD2蛋白表达，观察RPMI8226/R对烷化剂药物敏感性的变化。PJ-34作用细胞后，采用实时荧光定量PCR检测参与FA/BRCA途径对DNA损伤修复的基因表达的变化；采用Western blot法检测FA/BRCA途径中的关键蛋白FANCD2的表达情况；运用流式细胞术检测PJ-34对细胞凋亡及细胞周期的影响。用彗星实验及γH2AX焦点法检测PJ-34对细胞DNA损伤修复的影响。结果：将针对FANCD2 基因的siRNA转染RPMI8226/R，可以抑制细胞中FANCD2基因表达，转染细胞较转染前细胞对烷化剂的敏感性升高。PJ-34能够显著增加RPMI8226/R细胞对马法兰的敏感性，且与抑制FA/BRCA途径导致DNA损伤修复减弱有关。结论：人多发性骨髓瘤多药耐药细胞株RPMI-8226/R其多药耐药性的产生可能与FA/BRCA途径中的FANCD2表达增强有关，沉默FANCD2表达可以提高多药耐药MM细胞对烷化剂的敏感性，而RNA干扰是一种沉默FANCD2表达的理想方法。PJ-34能够显著增强RPMI8226/R细胞对马法兰的敏感性，通过抑制FA/BRCA途径对DNA损伤的修复来逆转细胞的耐药性，因此，PJ-34可能在克服多发性骨髓瘤多药耐药的治疗中具有一定的临床价值。
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DOI：
--
发表时间：
2013
期刊：
现代肿瘤医学
影响因子：
--
作者：
[肖晖, 魏恒, 熊婷, 陈小琼]
通讯作者：
陈小琼
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